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人骨髓间充质干细胞无血清培养的实验研究

崔俊成  
【摘要】: 目的建立一种体外无血清培养扩增人骨髓间充质干细胞的方法,为骨组织工程研究提供种子细胞。 方法从5例手术病人骨髓中分离制备单个核细胞悬液,分别接种于有血清培养基及自制的无血清培养基中,比较两种培养条件下细胞生长情况,流式细胞仪分析两种培养条件下间充质干细胞表面CD分子表达情况及细胞周期。 结果有血清培养2~3天后细胞开始出现贴壁生长,1周左右有细胞丛生长,12~14天细胞融合成片,呈典型的旋涡状排列。无血清培养4~5天后细胞开始出现贴壁生长,8~10天左右有细胞丛生长,16~20天细胞融合成片。单层融合的MSCs消化传代培养,有血清培养1周左右达融合,无血清培养9~10天左右达融合,可继续传代扩增。流式细胞仪检测显示,两种培养条件下扩增后的人骨髓MSCs均不表达CD14,CD34和CD45,而强表达CD29、CD54、CD105;无血清培养组G_0/G_1期细胞比例明显高于有血清培养组(P<0.05)。 结论 1.利用自行配制的无血清培养基能较好地培养、扩增人骨髓MSCs。 2.无血清培养组G_0/G_1期细胞比例明显高于有血清培养组,说明与有血清培养相比,无血清培养的细胞其干细胞特性保存更好。


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