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白细胞介素-2对前列腺增生上皮细胞增殖、凋亡及旁分泌的影响

王龙  
【摘要】: 第一章前列腺增生上皮细胞中白细胞介素-2及其受体的表达 目的:炎症与良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)关系密切,BPH组织中浸润的炎症细胞可产生大量白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2),IL-2及其受体在上皮细胞中表达增高,可能在BPH发生和发展中起重要作用。本研究拟探讨BPH组织中IL-2的表达及其与BPH合并炎症的病理组织学关系。观察人良性前列腺增生上皮细胞株BPH-1中白细胞介素-2受体(Interleukin-2 receptor,IL-2R)α、IL-2Rβ和IL-2Rγ的表达。 方法:应用免疫组织化学技术分别检测16例单纯BPH和42例合并炎症的BPH组织中IL-2蛋白的表达。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测BPH-1细胞中IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ基因的表达;采用Western blot检测IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ蛋白的表达。 结果:(1)所有BPH组织均有IL-2蛋白表达,主要位于上皮细胞,在合并炎症的BPH中的表达显著高于单纯BPH。(2)RT-PCR结果表明BPH-1细胞表达IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ基因。(3)Westernblot检测到BPH-1细胞中IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ蛋白的表达。 结论:BPH组织中IL-2表达与浸润的炎症细胞有关。BPH-1细胞表达IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ,可作为一种较好的模型研究IL-2对BPH的影响。 第二章白细胞介素-2通过ERK1/2信号途径促进前列腺增生上皮细胞增殖 目的:研究人重组IL-2对BPH-1细胞增殖的作用及其信号转导途径。 方法:细胞增殖水平用MTT法检测。p-JNK,JNK,p-p38,p38,p-ERK1/2,ERK1/2用Western blot检测,联合ERK1/2信号转导阻断剂PD098059,p38信号转导阻断剂SB203580和JNK信号转导阻断剂SP600125干预,以探讨IL-2对BPH-1细胞增殖的信号转导机制。 结果:(1)MTT检测表明IL-2显著促进BPH-1细胞的增殖,且呈剂量依赖性。(2)IL-2干预诱导BPH-1细胞ERK1/2磷酸化。ERK1/2信号转导阻断剂PD098059能抑制IL-2促进BPH-1细胞增殖的作用,而p38信号转导阻断剂SB203580和JNK信号转导阻断剂SP600125无明显作用,说明ERK1/2在IL-2促进BPH-1细胞增殖中起关键作用。 结论:IL-2通过ERK1/2信号转导途径促进BPH-1细胞增殖。 第三章白细胞介素-2对前列腺增生上皮细胞凋亡及Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白表达的影响 目的:研究IL-2对BPH-1细胞凋亡及凋亡相关基因(Bcl-2,Bax,Caspase-3)表达的影响,探讨IL-2对BPH-1细胞凋亡的作用机制。 方法:细胞凋亡用吖啶橙/溴乙啶染色和酶联免疫吸附法(ELISA)检测。Bcl-2,Bax,Caspase-3蛋白表达用Western blot检测。 结果:(1)吖啶橙/溴乙啶染色和ELISA检测均表明,IL-2抑制BPH-1细胞凋亡,且呈时间及剂量依赖性。(2)IL-2干预可诱导Bcl-2蛋白表达,抑制Bax表达和Caspase-3的裂解活化。 结论:IL-2抑制BPH-1细胞凋亡与Bcl-2表达上调、Bax表达下调以及Caspase-3激活被抑制有关。 第四章白细胞介素-2通过调节前列腺增生上皮细胞的旁分泌抑制前列腺间质细胞分化 目的:前列腺间质和上皮细胞通过旁分泌和自分泌各种细胞因子相互影响。本研究观察IL-2对BPH-1细胞TGF-β1基因表达和TGF-β1蛋白分泌的影响,以及有无IL-2刺激的BPH-1条件培养液(conditioned medium,CM)对前列腺间质细胞分化的影响。 方法:采用RT-PCR测定BPH-1细胞TGF-β1基因的表达。酶联免疫吸附法(ELISA)检测BPH-1CM中TGF-β1水平。Western blot检测肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)蛋白在前列腺间质细胞中的表达来判断间质细胞的分化。 结果:(1)IL-2抑制BPH-1细胞TGF-β1基因的表达(2)IL-2抑制BPH-1细胞TGF-β1的分泌。(3)BPH-1CM可促进前列腺间质细胞SM-MHC蛋白的表达,TGF-β1中和抗体能抑制该作用,而经过IL-2刺激的BPH-1CM抑制间质细胞SM-MHC蛋白的上调。 结论:IL-2可抑制BPH-1细胞TGF-β1的基因表达和蛋白分泌,从而间接抑制前列腺间质细胞的分化。


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