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脐血单个核细胞静脉移植对自发性高血压大鼠缺血再灌注脑损伤治疗的实验研究

胡柯  
【摘要】: 目的:观察自发性高血压大鼠(SHR)缺血再灌注性脑损伤后人脐血单个核细胞(CMNCs)静脉移植对神经功能的恢复作用以及探讨其作用机制,为脐血单个核细胞在人类缺血性心脑血管疾病中的应用提供实验依据。 方法:采用羟乙基淀粉法分离脐血以获得脐血单个核细胞(CMNCs),体外培养并以4.6—二胺—2苯基吲哚(DAPi)标记标记细胞核。线栓法建立自发性高血压大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),符合条件的SHR分成两组:治疗组(n=30)和对照组(n=30),同时设置假手术组(n=20)。治疗组术后48h 1×10~6 CMNCs经尾静脉注射至体内,对照组注射相同体积的细胞培养基,假手术组SHR不栓塞大脑中动脉且不予以移植。分别在移植后的3d、7d、14d采用Bederson评分法评估各组SHR神经功能,利用图像分析法精确计算经TTC染色后治疗和对照组脑组织梗死面积的百分比,倒置荧光显微镜下观察并计数移植组脑组织中DAPi阳性染色细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测治疗和对照组缺血侧脑组织血管内皮生长因子(VEGF)的浓度,免疫组织化学法计数各组SHR脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)阳性细胞的数目,逆转录聚合链式反应(RT-PCR)检测移植7,14d时治疗和对照组缺血侧脑组织BDNFmRNA的表达水平。 结果:(1)利用线栓法栓塞大鼠大脑中动脉建立自发性高血压大鼠脑缺血再灌注损伤模型成功率为73.8%,术后神经功能评分为2.90,与假手术组相比神经功能缺损明显。(2)移植后1d治疗和对照组Bederson评分无显著差别,移植后7、14d治疗组显著低于对照组(p<0.05)。(3)移植后1d治疗和对照组脑梗死面积无显著差别,移植后7、14d治疗组显著低于对照组(p<0.05)。(4)治疗组移植后1d梗死侧见少量DAPi阳性染色细胞,移植后7、14d梗死侧DAPi阳性染色细胞数目增加(p<0.05)。(5)移植后14d治疗组梗死侧脑组织中血管内皮生长因子浓度高于对照组(p<0.05)。(6)移植后1d对照组和假手术组BDNF阳性细胞数目无显著差别,7,14d时BDNF阳性细胞数目有所增加(P<0.05);各时间点上治疗组BDNF阳性细胞数较对照组和假手术组均明显增加(p<0.05或<0.01)。(7)移植后7,14d时治疗组梗死侧脑组织BDNFmRNA表达较对照组增加(P<0.05)。 结论:1.栓塞大脑中动脉建立自发性高血压大鼠脑缺血再灌注损伤模型具有成功率高,制作效果稳定等优点。2.脐血单个核细胞静脉移植可明显改善自发性高血压大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经行为学,缩小脑缺血损伤面积。3.静脉移植脐血单个核细胞能够迁移至缺血侧脑组织且在内存活、增殖,并促进缺血侧脑组织BDNF和VEGF表达水平增高。4.脐血单个核细胞静脉移植对自发性高血压大鼠脑缺血再灌注损伤治疗疗效机制可能与移植细胞迁移至缺血侧脑组织并存活、增殖和促进缺血侧脑组织BDNF和VEGF表达水平增高有关。


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