Fe_3O_4 MNP介导CD基因转染U251胶质瘤细胞的研究

【摘要】： 目的以Fe3O4纳米颗粒介导含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因的pCMVCD质粒转染U251胶质瘤细胞,体外观察5-氟胞嘧啶(5-FC)对转染CD基因的胶质瘤细胞的诱导凋亡作用。方法体外扩增、酶切鉴定pCMVCD质粒并采用DNA序列测定pCMVCD质粒中的CD基因;Fe3O4纳米载体介导pCMVCD质粒转染U251细胞,G418筛选培养并获取抗性细胞克隆(即U251/CD细胞);透射电子显微镜观察Fe3O4纳米载体介导的pCMVCD质粒转染U251细胞形态,免疫荧光检测U251/CD细胞的CD基因蛋白水平表达;使用不同浓度的5-FC作用于U251/CD细胞,MTT法测定细胞活性比率。结果Fe3O4纳米颗粒介导含CD基因pCMVCD质粒成功转染进入U251细胞,获取了含CD基因的U251/CD细胞,免疫细胞化学染色显示U251/CD细胞成功表达了CD蛋白。基因转染使U251/CD细胞对5-FC高度敏感,未转染的U251细胞对5-FC不敏感,IC50约为6500μmol/L。在含不同浓度的5-FC培养液中培养,U251/CD细胞在透射电镜下出现了典型的凋亡形态,呈剂量依赖性。结论建立了以Fe_3O_4纳米载体介导的U251胶质瘤细胞的5-FC/CD自杀基因系统;5-FC对CD基因修饰的U251细胞有杀伤作用,为胶质瘤基因治疗的在体研究提供依据。