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大鼠脑缺血再灌注和丁苯酞干预后海马组织中Smad4的表达变化及Smad4在高尔基体定位的研究

朱琳  
【摘要】: 目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤以及丁苯酞干预后Smad4的表达变化,以及Smad4亚细胞定位,探讨丁苯酞的神经保护机制。 方法:(1)分组:健康SD大鼠50只,随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组(I/R)、丁苯酞干预组(NI/R);观察在脑缺血再灌注后6h、1d、3d、7d的各相应时间点Smad4的表达:(2)模型制作:缺血再灌注组大鼠予以夹闭双侧颈总动脉15min以及硝普钠控制低血压后再灌注;假手术组大鼠仅分离双侧颈总动脉不予以夹闭;丁苯酞干预组在实验前两天开始丁苯酞灌胃(80mg/kg,BID)直到处死,余步骤同缺血再灌注组;(3)HE染色观察病理变化;(4)免疫组织化学染色观察Smad4表达变化。(5)采用免疫荧光共聚焦的方法观察Smad4在额叶皮质细胞高尔基体的定位情况。 全部数据采用SPSS13.0进行统计分析。 结果: (1)HE染色:1.大鼠海马CA1区神经元细胞减少,神经元变性、坏死,这种改变在缺血再灌注后3天及7天最为明显。丁苯酞干预后,干预组中存活的海马CA1区神经细胞较非干预组明显增加。 (2)免疫组化:Smad4在神经细胞胞核及胞质中均有阳性表达。正常对照组与假手术组大鼠海马CA3区神经元中Smad4阳性细胞表达较少,Smad4在缺血再灌注损伤后在各时间点表达显著上调,1d时明显升高,在3d和7d时达到高峰,与对照组比较,有显著性差异(P0.05)。丁苯酞干预组Smad4表达在各相应时间点较对照组表达上调,趋势与缺血再灌注组一致,阳性率明显低于缺血再灌注组(P0.05)。 (3)高尔基体特异性标志物TGN46的免疫荧光和Smad4的免疫荧光在大鼠皮质细胞内明显发生重叠。 结论: 1. Smad4在缺血再灌注的脑组织中表达升高并可能发挥神经保护作用。 2.丁苯酞可能通过与Smad4的协同作用来减轻脑组织损伤程度,发挥神经保护作用。 3.在大鼠皮质细胞内,Smad4存在于高尔基体,表明Smad4的分泌依赖高尔基体,同时Smad4可能对高尔基体具有保护作用。


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