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高效液相色谱—荧光法同时测定肺癌患者血清色氨酸和酪氨酸

任亚萍  
【摘要】: 目的:1.建立一种简单、快速并能同时测定血清中色氨酸(Trp)和酪氨酸(Tyr)的高效液相色谱—荧光检测法(HPLC-FD)。 2.初步探讨肺癌患者中血清色氨酸(Trp)和酪氨酸(Tyr)含量测定的临床意义。 方法:1.血清标本与等量5%(V/V)高氯酸溶液混合处理去蛋白后离心取上清液20μL直接进样分析。用Megres C18柱(250mm×4.6mm i.d.,5μm)分离;流动相为10%(v/v)乙腈;流速1.2mL/min;荧光检测波长:0-5min激发光波长228nm,发射光波长为306nm,5min后激发光波长285nm,发射光波长为353nm。室温下9min内完成分析测定。TRP和TYR均采用峰保留值比较法和叠加法进行定性分析,用外标法测定峰面积进行定量分析。通过对线性范围和检测限、精密度、回收率和干扰试验的考察,对该方法进行方法学评价。 2.测定健康成人(n=120例)和肺癌患者(n=80例)血清Tyr和Trp含量。探讨肺癌患者血清Tyr和Trp含量变化及其在肺癌分型分期、早期诊断、机制研究等方面的临床意义。 结果:1.血清和标准品样本的Tyr和Trp峰均分离良好,保留时间分别约为3.4和7.6min。Tyr的线性范围为0.275-275μmol/L,最低检出浓度为0.004μmol/L,回收率为90.5%-108.8%;Trp的线性范围为0.49-196μmol/L,最低检测浓度为0.005μmol/L,回收率为88.8%-97.2%。Tyr和Trp的日内、日间测定的相对标准偏差均小于5%,苯丙氨酸(Phe)、5-羟色胺(5-HT)、犬尿喹啉酸(KYNA)、犬尿氨酸(KYN)和肌酐(Cre)等物质对该法均无干扰。 2.120例健康成人血清Tyr含量范围为47.51-81.36μmol/L,均值为(66.40±8.55)μmol/L,血清色氨酸含量范围为37.12-71.05μmol/L,均值为(49.93±5.43)μmol/L。男女组比较,Trp含量有性别差异(P0.001),Tyr含量无性别差异(P0.05)。与正常对照组比较,肺癌组血清Trp含量显著降低(P0.01);腺癌(ADC)组血清Tyr和Trp含量显著低于鳞癌(SCC)组(P0.05);Ⅲ-Ⅳ期与Ⅰ-Ⅱ期患者在Tyr和Trp含量间差异无统计学意义。 结论:1.本文在国内外首次建立HPLC-FD法同时测定血清Tyr和Trp,方法简单、快速、灵敏、特异、准确,适宜于临床和科研工作。 2.通过对肺癌患者血清Tyr和Trp含量的测定,结果表明血清Tyr和Trp测定对肺癌的分型分期有一定的临床意义。


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