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脊髓肿瘤坏死因子-alpha(TNF-α)对大鼠切割损伤导致的机械痛敏的影响

梁纯波  
【摘要】: 目的:观察大鼠后足切割后脊髓肿瘤坏死因子-alpha (TNF-α) mRNA及蛋白质表达情况,并观察鞘内注射TNF-α溶解性受体依那西普(Etanercept)对大鼠后足切割损伤诱发的机械痛敏的作用,探讨TNF-α在外科手术疼痛的作用,并为此药在以后的临床应用提供理论依据。 方法: 1.健康成年雄性SD大鼠48只,随机分六组(对照组、1h、3h、6h、24h、72h,n=8)。采用纵行切割大鼠右后足作为外科疼痛模型,以vonFrey尼龙纤维刺激足底观察其50%缩足阈值作为机械痛敏的评价方法。 2.在切割机械性痛敏产生的不同时段(对照组、1h、3h、6h、24h、72h),取大鼠腰段脊髓,腰段为与坐骨神经相连节段。用实时定量RT-PCR方法和免疫组化方法检测TNF-αmRNA和蛋白质表达的变化。 3.健康成年雄性SD大鼠32只,随机分为四组(n=8)。NS(IT)组,鞘内注射生理盐水,后足不行切割手术;E(IT)组,鞘内注射依那西普,后足不行切割手术;NS(IT)+Inci组,鞘内注射NS,后足行切割手术;E(IT)+Inci组,鞘内注射依那西普,后足行切割手术。在各时间点(术前基础值,1h,3h,6h,24h,72h)测大鼠右后足50%缩足阈值。 结果: 1.大鼠右后足切割后痛阈均明显下降(P0.05,与基础水平相比),其中切割后3h痛阈降低最为显著,以后痛阈逐渐回升,72h后痛阈恢复至基础值。 2.后足切割后,脊髓水平TNF-αmRNA水平明显上调,与假手术组相比,切割后3h和6h TNF-αmRNA水平明显升高(P0.05)。TNF-α表达的峰值在切割后6h。术后72h,TNF-α的表达与假手术组接近。 3.免疫组化结果显示,后足切割后3h和6h,脊髓后角TNF-α水平明显上调。通过免疫双标观察,上调TNF-α主要表达在神经元上,星形胶质细胞和小胶质细胞有少量表达。 4.鞘内注射依那西普对基础痛阈并没有改变(P0.05,与生理盐水相比),但可减轻切割损伤导致的机械痛敏。 结论: 1.大鼠切割损伤后导致痛觉行为学变化(痛阈下降)与临床上术后疼痛相似,提示后足切割是反映外科手术疼痛的理想模型。 2.切割损伤导致脊髓后角神经元释放TNF-α。抑制脊髓上调的TNF-α可减轻切割损伤导致的机械性痛阈下降,说明上调的脊髓TNF-α促进切割损伤所致的痛觉过敏;抑制上调的TNF-α可能是治疗术后疼痛的潜在新方法。


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