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酯型茶黄素酶促水解形成简单茶黄素的条件优化及相关性能评价

蔡少华  
【摘要】:茶黄素是茶叶发酵的产物,最初从红茶中提取所得,也可以儿茶素为原料通过化学或生物方法合成。茶黄素大体可分为两类:化学结构中带没食子酯基的酯型茶黄素(TF-3-G、TF-3'-G、TFDG)和不带没食子酯基的简单型茶黄素(TF)。茶黄素的价值主要体现在其抗氧化、降血脂、抗癌防癌、降胆固醇等功能特性。本文就酯型茶黄素酶促降解为简单型茶黄素,及简单型茶黄素的细胞水平降脂特性和体外抗氧化活性作了深入探讨。 比较了单宁酶、脂肪酶、猪胰脂肪酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、糖化酶、果胶酶和a一淀粉酶对酯型茶黄素(TFDG)的水解效果,并对最佳水解酶的反应条件进行了优化。结果表明,单宁酶水解酯型茶黄素的效果最好,其反应最佳条件为:反应体系的温度为40℃、pH值为5.0、酶浓度为2.4mg/mL,最佳反应时间120min。水解后茶黄素中TF的含量从39.8 1mg/g提高到199.84mg/g。 比较了XDA-1、D101、HP-20、AB-8、D202、D14、NKA-9和聚酰胺8种树脂对茶黄素的静态吸附特性,筛选出纯化茶黄素的最佳树脂为D-14。动态吸附试验优化D一14纯化茶黄素的条件:上样液流速2BV/h、上样液浓度0.33mg/mL、洗脱液浓度梯度10%-30%-80%。 以0.1%的脂肪乳剂建立L-02人体肝细胞的高脂模型。MTT试验考察茶黄素对L-02人体肝细胞的毒副作用,并确定降血脂试验合适的茶黄素添加量。添加不同梯度的茶黄素培养48h,生化分析仪检测总甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的含量。总抗氧化能力测试盒、过氧化氢测试盒、羟自由基测试盒、抑制与产生超氧阴离子自由基测试盒检测茶黄素的体外抗氧化作用。 分析茶黄素在4℃、10℃、20℃、30℃的温度条件下在水中的溶解度以及不同颜色的光照、不同温度条件下、不同pH值条件下的稳定性。


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