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香菇多糖和黄芪多糖对小鼠免疫平衡影响的研究

李波  
【摘要】:多糖是一种天然的高分子化合物,是一种中药活性成分。许多国内外学者从不同的生物体内提取了大量的多糖物质进行研究,研究结果均显示出多糖具有对动物机体特异性和非特异的免疫刺激作用,体现出良好的刺激免疫功能的免疫学活性。其具有抗肿瘤、抗病毒、抗细菌、提高细胞毒性以及促进细胞因子分泌等多种功效,是一种良好的免疫增强剂。 在本文中选用黄芪多糖和香菇多糖进行了小鼠免疫实验,从脏器指数、巨噬细胞吞噬能力、迟发型变态反应、NK细胞活性、淋巴细胞增殖、细胞因子分泌、多糖对疫苗效果的影响等方面评价了两种多糖对小鼠免疫能力的作用,并比较了两种多糖的免疫增强效果。初步确定了多糖的有效作用浓度,为多糖的合理使用及免疫增强剂的筛选提供了理论依据。 1探讨了用苯酚-硫酸法测定多糖的线性符合度以及准确性。实验结果表明在多糖经过纯化之后用苯酚-硫酸法测定时,多糖的浓度与多糖反应液的吸光度在0.01-1.0mg/ml的浓度范围内能找出比较好的线性关系,能够比较准确的测定多糖的浓度,但是在多糖中含有杂质时,就可能不能准确测定其成分。在本文中对多糖的粗提物及纯化后加入蛋白质测定的结果都和多糖纯化后的纯多糖结果差异较大,表明多糖中如果含有蛋白质或者一些能和苯酚、硫酸反应显色的物质都会严重影响测定结果,使得测得的多糖浓度不准确,表明苯酚-硫酸法不能准确测定含有蛋白质杂质的多糖浓度。 2通过测定小鼠的脏器指数、单核巨噬细胞吞噬能力、迟发型变态反应程度、淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性以及Th1和Th2的某些细胞因子水平等免疫指标,结果表明两种多糖均能够显著地提高小鼠的迟发型变态反应程度,增强小鼠的单核巨噬细胞吞噬能力,提高NK细胞的活性,促进细胞因子的分泌水平,刺激小鼠产生更高的抗体水平。从免疫平衡系统中分析了多糖对小鼠Th1/Th2免疫平衡的影响,两种多糖都表现对受到免疫抑制的小鼠具有显著的刺激免疫功能的效果,但是并不明显的影响Th1/Th2免疫平衡的偏移,而是同时提高两方面的免疫能力,同时提高Th1/Th2的细胞因子分泌,有效抵抗环磷酰胺的免疫抑制。 3用多糖溶液和疫苗同时使用,通过抗体水平的检测发现多糖能加速抗体产生。通过监测临床症状以及血液生化指标观察了在高剂量连续15天腹腔注射多糖溶液的情况下,多糖溶液对小鼠的急性不良作用。结果表明在多糖溶液0.8g/kg·体重的剂量下(相当于正常使用剂量的60倍),小鼠无明显的临床症状,血液生化指标均在正常值范围内,说明在此剂量下多糖不表现明显的不良作用。


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