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L.brevis M8 S-层蛋白的黏附性及其引起Caco-2细胞蛋白质差异表达研究

范郁冰  
【摘要】:乳酸菌作为益生菌在功能性食品产业中具有很大的应用前景,其发挥益生性的重要前提为黏附至胃肠道中。乳酸菌的S-层蛋白由于其特殊的结构位置,一直被人们认为参与了黏附的过程,然而此方面的研究却很少。目前,已有人成功的将S-层蛋白的编码基因表达到不含S-层蛋白的乳酸球菌中,发现可以增强乳酸球菌的黏附力。这表明S-层蛋白在增强益生菌的黏附性方面具有一定的潜力。因此,对于S-层蛋白的黏附性及黏附机制的研究显得尤为重要。 本论文主要研究L. brevis M8S-层蛋白对结肠癌细胞Caco-2的黏附性及其引起肠细胞蛋白变化情况,旨在进一步确定S-层蛋白的黏附性及其黏附机制。主要的研究内容和结果如下: 1、采用5mol/L盐酸胍提取L. brevis M8S-层蛋白,并采用SephadexG-75凝胶层析柱对提取的蛋白质溶液进行分离纯化。经SDS-PAGE检测得出:以Tris-HCL为洗脱液,SephadexG-75为层析柱,可以获得电泳纯度的、具生物活性的S-层蛋白。 2、运用免疫学原理,研究含S-层蛋白的L. brevis M8菌体抗体结合前后与Caco-2的黏附力变化情况;同时以细胞总蛋白为研究对象、S-层蛋白为第一抗体、胶体金标记的S-层蛋白抗体为第二抗体进行Western Blot,从而研究S-层蛋白对肠细胞蛋白黏附特性。试验结果得出:含有S-层蛋白的菌体黏附力高于不含S-层蛋白的菌体;S-层蛋白可以与分子量在130kDa、63kDa、45kDa、0kDa及13kDa的肠细胞蛋白发生较好的黏附。 3、采用蛋白质双向电泳技术对S-层蛋白黏附肠细胞引起其变化的情况进行分析,分别设置正常组、试验组1(0.2mg/mlS-层蛋白处理)和试验组2(0.5mg/mlS-层蛋白处理)。用PDQuest软件对图片进行分析得出:试验组1存在差异表达蛋白12个,上调蛋白2个,下调蛋白5个,未表达的蛋白有5个且无新蛋白表达;试验组2中存在差异点17个,上调蛋白3个,下调蛋白8个,未表达蛋白5个且引起了1种新蛋白的表达。


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