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儿茶素对肾病综合征大鼠防治机制研究

何小解  
【摘要】: [研究背景]儿童肾病综合征是小儿泌尿系统的主要疾病之一,而糖皮质激素是目前治疗肾病综合征的首选药物。然而,仍有部分病人反复发作,迁延不愈,导致肾脏病理损害不断进展,最终导致终末期肾病。目前的研究已经证明,活性氧自由基在肾脏病的发生与发展中起着十分重要的作用,它的持续存在可致肾组织持续受损,而肾脏固有细胞特别是肾小球系膜细胞损伤后又可分泌多种炎症因子,大量炎症因子的持续存在又可导致活性氧自由基的产生。大量活性氧自由基的存在又可引起肾小球损伤,从而引起细胞增殖以及基质增多。儿茶素目前已被证明能有效清除氧自由基,但其对于肾病综合征的防治效果及其机制尚不十分清楚。 [目的] 探讨儿茶素对肾病综合征的防治效果以及其对肾固有细胞增生周期调控蛋白与肾血流动力学的干预情况,旨在阐明儿茶素对肾病综合征的防治机制,为有效地延缓肾病综合征的病理进展提供理论依据和科学手段。 [方法]30只大鼠随机分为正常对照组、阿霉素肾病组、儿茶素预防组、儿茶素治疗组、激素治疗组、儿茶素+激素治疗组六组。除正常对照组外,其它五组分别于实验第一天尾静脉注射阿霉素5mg/Kg;儿茶素预防组于实验第一天行儿茶素(500mg/Kg·d)灌胃至实验末;激素治疗组自实验第二周末皮下注射地塞米松(1.8mg/Kg·d)至实验末;儿茶素治疗组自实验第二周末行儿茶素(500mg/Kg·d)灌胃至实验末;儿茶素+激素治疗组自实验第二周末皮下注射地塞米松(1.8mg/Kg·d)及儿茶素(500mg/Kg·d)灌胃至实验末。采用生物化学法测定血清中·OH、NO、MDA、tSOD、GSH-PX的含量及24小时尿蛋白含量;采用半定量评分法分别对肾小球、小管间质的病理改变进行计分评价;采用免疫组化法检测肾组织中CyclinD1、PCNA、P16、P21、P27、TGF-β1的蛋白质表达水平;采用原位杂交法检测肾组织中CyclinD1、P21、TGF-β1mRNA的表达水平。 [结果]1、2周末,儿茶素预防组与儿茶素治疗组大鼠24小时尿蛋白排泄量明显低 1市人儿广学 硕卜学趴?Z 于激忿i疗组(分别叫.川刀刀5)和肾病组(P、0刀1)。头验木,檄素治行组大鼠、儿 茶素十激素联合治疗组大鼠24小时尿蛋白排泄量明显低于肾病组(P<0刀1)。 二、)[茶素预防组与儿茶素治疗组大鼠血清中·OH、NO明显低于肾病组叩分别 <0刀1,0.05人 儿茶素十激素联合治疗组大鼠血清中·OH、M D A浓度明显低于激素治 疗组(P<0刀1)。儿茶素预防组与儿茶素治疗组大鼠血清中 **A 明显低于肾病组 (P<o刀1)。并且·OH、MDA二者之间高度正相关(P<o刀1)。 3、儿茶素预防组与儿茶素治疗组大鼠血清中总超氧化物歧化酶Ootal superoxide dismutase,tSOD*谷脐甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSHIX)活性明显高 于肾病组(P功.们)。儿茶素十激素联合治疗组大鼠血清中GOD与*S卜PX活性明显 高于激素治疗组(P<0.of)。并且 tSOD与 GSH-PX二者之间高度正相夫(P<0.01)。 4、与肾病组相比,儿茶素预防组、)[茶素治疗组、儿茶素+激素治疗组血清Alb明 显增高,BUN与TG含量明显下降。与激素治疗组相比,儿茶素+激素治疗组能上调血 清中Alb的水平,下调血清中TG的含量,与对照组相比,激素治疗组、)[茶素预防组、 儿茶素治疗组、儿茶素+激素抬疗组均能下调血清中TG的含量c 5、儿茶素预防组、儿茶素治疗组、儿茶素+激素治疗组大鼠肾脏病理积分明显低于 肾病组(P<0刀1)。 6、儿茶素预防组、肾病组、儿茶素治疗组、激素治疗组、儿茶素十激素联合治疗 组大鼠肾组织中PCNA蛋白质表达水平明显高于对照组(P刃刀1);但与肾病组相比, 各组均显著下降(P<O.01):而激素治疗组与儿茶素+激素治疗组相比显著增高(P<0刀1)。 7、与对照组相比,各组肾组织中CyclinDI、CyclinDlmRNA明显增高(P<0刀1人 与肾病组相比,其它各组明显下降(P<0.01人相关分析发现,CyclinDI与CyclinDI-mRNA 二者高度正相关(P<0刀1)。 8、儿茶素预防组、)L茶素治疗组大鼠肾组织中P27蛋白质表达水平高于肾病组 (P<0刀5):激素治疗组、儿茶素+激素联合治疗组大鼠则显著增高(P<0刀1):激素治 疗组明显低于儿茶素十激素联合治疗组(P<O.01)。 9、儿茶素预防组、儿茶素治疗组大鼠肾组织中TGF-BI、TGF刁-mRNA表达水 平低于肾病组(*<0刀5):激素治疗组大鼠、儿茶素十激素联合治疗组大鼠则显著降低 (P<0刀1);并且*G卜pl和**卜lp-m RNRNA表达二者之间高度正相关(k0刀1)。 10、各调节蛋白的相关分析发现,P16与CydhDI、P27高度正相关(P<O.m人与 PZI呈负相关(P<0*1);PZI与P27呈负相关(P<0*1);CyClinDI与P2


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