收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

农杆菌介导法将Bt毒蛋白基因导入水稻

皮灿辉  
【摘要】: 本文以当前培育超级杂交稻正在广泛使用的两个优势亲本培矮64S和9311作为主要研究对象,对影响其成熟胚来源的愈伤组织诱导、分化和植株再生条件进行了优化;对影响农杆菌转化上述籼稻的条件进行了探索和优化;建立了高频的离体再生系统和比较高效的遗传转化方法。同时对转基因植株进行了分子检测和抗虫性分析。 1.培矮64S和9311离体再生系统的优化 研究了影响两种籼稻愈伤组织诱导、继代和分化成苗的相关因素,结果表明:种子本身的生理状态是影响愈伤组织诱导频率的主要因素之一;将N6培养基的大量元素与MS微量元素组合,同时提高VB1和肌醇的含量可显著提高愈伤组织的诱导和培养效果;在合适的2,4-D浓度下,添加其他外源激素不能显著提高愈伤组织的诱导率,但可改善愈伤组织的胚性生长状态;交替使用不同的培养基成分和激素浓度配比可使长期继代培养物保持胚性状态,延长继代培养的时间;预分化和干燥处理使植株再生的频率和质量大大提高。 采用我们优化后的培养条件与处理方式,培矮64S和9311愈伤组织的诱导频率分别可达到62.45%和85.30%;继代培养时间达三个月左右仍能保持较好的胚性生长状态;对于继代两次胚性生长状态良好的愈伤组织分化频率分别可达到85.5%和87.7%。 2.采用农杆菌介导法将Bt毒蛋白基因导入水稻 同样以上述两种籼稻为主要研究材料,比较了分别以预培养的幼胚和幼穗、幼胚、成熟胚来源的愈伤组织作为转化受体的愈伤组织转化频率,结果表明预培 养4~6天的幼胚最适宜作为农杆菌介导转化的受体;其次是来源于幼胚和成熟胚 的生长状态良好的胚性愈伤组织。 以 YEB培养基作为共培养培养基,对于农杆菌 EHA 05…Ub.m)来说,菌 液浓度为OD值一0.8时,愈伤组织的转化率最高。 在农杆菌侵染愈伤组织过程中,通过负压处理可明显提高水稻愈伤组织的转 化频率。对于60ml的注射管而言,抽拉距离确定在6cm左右,抽拉次数40次 对提高水稻愈伤组织的转化频率最为有效。 采用CaZ+和表面活性剂处理以提高转化频率是本实验的重大创新。在愈伤 组织浸染后,分别以浓度为20mmol/L和30mmol/L的CaC12的溶液处理培矮645 和 93if胚性愈伤组织,同时在处理液中添加 0.l%Tween20以降低细胞的表面张 力,对促进愈伤组织的转化和转化植株的再生效果最好。经上述处理可使 93 愈伤组织的转化率和抗性植株再生率分别达到58.33%和33.33%。 选取部分植株进行PCR分析、DNA点杂交、PCR-Southern杂交。以上分子 检测结果表明,绝大部分经抗性筛选得到的转化植株的基因组中已整合有外源基 因。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王以秀,严菊强,薛庆中;雀舌黄杨(Buxus harlandii)愈伤组织遗传转化的研究[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);1991年01期
2 易自力,曹守云,王力,储成才,李祥,何锶洁,唐祚舜,周朴华,田文忠;提高农杆菌转化水稻频率的研究[J];遗传学报;2001年04期
3 王萍,吴颖,季静,王罡,杨庆凯;抗生素对大豆愈伤组织的诱导和生长的影响[J];遗传;2001年04期
4 王芋华;水稻高效转化系统的建立[J];应用与环境生物学报;2004年02期
5 徐子勤,贾敬芬;发根农杆菌A_4菌株转化红豆草途径及转化组织植株再生研究[J];兰州大学学报(自然科学版);1994年02期
6 权瑞党,尚梅,张举仁;农杆菌介导的玉米自交系愈伤组织转化条件的优化[J];植物生理与分子生物学学报;2003年03期
7 程家胜,Dandekar,A.M.,Uratsu,S.L.;苹果基因转移技术研究初报[J];园艺学报;1992年02期
8 张乐民,周长久,王福钧;发根农杆菌对胡萝卜及大白菜的转化[J];核农学报;1992年04期
9 刘志学,张旭,徐亚南,何艺园,马向前,沈大棱,唐克轩;用LBA4404/pCAMBIA系列转化水稻的最佳条件[J];复旦学报(自然科学版);1999年04期
10 ;应用农杆菌转化水稻的研究[J];高技术通讯;1998年11期
11 徐淑红,徐香玲;植物遗传转化中抑菌剂的选择[J];植物研究;2004年04期
12 王小兰;刘顺枝;姚焱;杨礼香;何光存;;水稻OsWNK基因超量表达载体的构建及转化[J];广州大学学报(自然科学版);2009年04期
13 李宝平,赵俊侠,石跃进,郭三堆,桑瑜,齐宏立,焦改丽,陈志贤;关键因子对棉花利用农杆菌介导法导入外源基因的影响[J];作物学报;2001年01期
14 权瑞党,尚梅,王兆玉,张举仁;农杆菌介导的雪花莲凝集素基因转入玉米骨干自交系[J];西北植物学报;2004年05期
15 施和平,李玲,潘瑞炽;乙酰丁香酮对发根农杆菌遗传转化黄瓜的影响[J];云南植物研究;1997年04期
16 王力,张云孙,陈屹,高照,李静,蔺兆星;影响根癌农杆菌转化水稻频率的因素研究[J];云南大学学报(自然科学版);1999年02期
17 孙敏,陈安和;Ri质粒转化及其在植物基因工程中的应用[J];渝州大学学报(自然科学版);1995年01期
18 郑世学,董五辈,李学宝;芹菜愈伤组织转化的初步研究[J];华中师范大学学报(自然科学版);1996年03期
19 刘伟华,姜静,谢桂芹,徐香玲,李集临,王毅;Ri质粒转化桔梗再生植株的研究[J];生物技术;1994年02期
20 徐子勤,贾敬芬,胡之德;发根农杆菌A_4菌株转化苜蓿悬浮培养物[J];生物工程学报;1997年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李一星;周俊初;;紫云英遗传转化体系的建立[A];湖北省生物工程学会2004年年会学术报告及论文摘要汇编[C];2004年
2 傅经国;吴鸣建;何娟;尚玉俊;赵天增;宋立新;;RP-HPLC法测定苦皮藤愈伤组织中苦皮素A的含量[A];中国制药工业药理学会20周年学术会议论文集[C];2002年
3 曾小美;王凌健;夏镇澳;沈允钢;;烟草光自养型愈伤组织的光合特性研究[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
4 翟晓巧;;二乔刺槐愈伤组织超低温保存研究[A];第六届全国林木遗传育种大会论文集[C];2008年
5 朱向涛;王雁;彭镇华;律春燕;郑宝强;;牡丹愈伤组织扫描电镜观察[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
6 孙震晓;刘传召;郭善利;马清温;;植物愈伤组织超低温保存的实验研究[A];第七届全国系统与进化植物学青年学术研讨会论文摘要集[C];2002年
7 周安莲;余茂德;;桑子叶愈伤组织的诱导培养[A];中国蚕学会第三届青年学术研讨会暨浙江省第二届青年学术论坛——蚕桑分论坛论文集(上册)[C];2001年
8 许鸿源;蒙爱东;李春霞;邓锡青;杨美纯;周歧伟;黄春燕;许鸿章;;灵发素(LFS)对三七愈伤组织发生和增殖的影响[A];2003年广西植物生理学年会论文汇编[C];2003年
9 佘建明;张保龙;陈志一;倪万潮;;草坪型高羊茅成熟种子离体培养植株再生技术研究[A];全国作物细胞工程与分子技术育种学术研讨会论文集[C];2003年
10 许明淑;黄璐琦;;贯叶金丝桃愈伤组织的诱导研究[A];全国中药研究与开发学术研讨会论文摘要集[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴顺;籼稻成熟胚再生体系的建立及反义waxy基因转化籼稻的研究[D];湖南农业大学;2005年
2 伍碧华;小麦离体培养的营养器官与花器官发育研究[D];四川农业大学;2003年
3 钟原;紫斑牡丹分生结节的诱导与培养[D];北京林业大学;2011年
4 宋建英;邓恩桉微体快繁技术和耐寒性的研究[D];南京林业大学;2008年
5 何铁剑;菠萝组织与细胞培养及其诱导产酶研究[D];华南理工大学;1994年
6 朱向涛;凤丹体胚发生及愈伤组织诱导芽分化研究[D];中国林业科学研究院;2010年
7 陈超;红掌愈伤组织和再生团块的发育及四倍体诱导[D];南京农业大学;2011年
8 秦磊;牡丹分生结节诱导、发生与发育及细胞组织学观察[D];北京林业大学;2012年
9 姚娜;竹子组织培养与毛竹愈伤组织分化中基因表达分析[D];中国林业科学研究院;2010年
10 耿小丽;苜蓿单倍体、纯合四倍体的诱导及愈伤组织DNA含量变异的研究[D];甘肃农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 皮灿辉;农杆菌介导法将Bt毒蛋白基因导入水稻[D];湖南农业大学;2003年
2 姚丹;农杆菌介导法将Bt杀虫蛋白基因转入玉米自交系的研究[D];吉林农业大学;2003年
3 关淑艳;淀粉分支酶基因反义表达载体在玉米中的遗传转化研究[D];吉林农业大学;2004年
4 王惠珍;穗冠花愈伤组织的诱导和花色素苷积累的研究[D];华南师范大学;2002年
5 张清梅;中小型苹果再生体系的研究[D];内蒙古农业大学;2005年
6 高兵;不同培养条件对嘎拉苹果愈伤组织遗传变异的影响研究[D];南京农业大学;2005年
7 赵莉;不同营养条件对大苞景天愈伤组织诱导及植株再生的影响研究[D];四川农业大学;2005年
8 刘晓光;枣愈伤组织诱导和原生质体分离研究[D];河北农业大学;2006年
9 王辉;香榧的组织培养及快繁技术的研究[D];浙江大学;2006年
10 赵世萍;蝴蝶兰组织培养过程中特异蛋白表达差异的研究[D];东北师范大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;俄罗斯培育出更耐涝小麦[N];新华每日电讯;2010年
2 唐山市丰南区林业局 汪林华 魏文娟 贾久正;这是杨树破腹病[N];河北科技报;2006年
3 濮阳市世锦现代农业发展有限公司 张晖 王绪月;花卉无性系的快速繁殖[N];中国花卉报;2006年
4 容城县农牧局 赵会芳 容城县八于乡农技服务站 沈山林;大棚西瓜嫁接育苗十注意[N];河北科技报;2007年
5 本报记者 唐婷朴淑瑜;走进植物“训练营”[N];科技日报;2007年
6 曹涤环 刘建武;影响苗木嫁接成活的因素[N];中国绿色时报;2008年
7 山东 吴建民 田俊华;硫磺在花木栽培上的妙用[N];中国花卉报;2005年
8 河南省三门峡市园林科学研究所 许冬丽 高秀云 李艳杰;春植树木夏亡原因及防范[N];中国花卉报;2010年
9 青县职教中心 刘恩祥;枣树蘸蜡插皮接效果好[N];河北科技报;2006年
10 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室 张启发;转基因技术(上)[N];科技日报;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978