复方白毛藤注射剂有效成份及其药理作用研究

【摘要】：为了有效防治目前养殖条件下动物细菌性、病毒性疾病的发病和流行，克服西药滥用或不合理使用对动物机体的不良反应及药物残留的危害等缺点，特研制了一种既能抗菌抗病毒，又能提高动物机体免疫功能的兽用复方白毛藤注射剂。现将研究结果报道如下： 根据中兽医理论，中药药理学原理和单味中草药的中药学特性，按水醇法提取和制剂学要求制备了以白毛藤为君药，以板兰根、蒲公英、黄连为辅药，以白术为佐药的复方白毛藤注射剂。该注射剂为棕红色的澄清透明液体，pH值在4.5～5.5之间，每1ml注射剂相当于生药1g。 采用中草药有效成份预试法和圆形滤纸层析预试法对复方白毛藤注射剂进行有效成份的定性分析，结果表明，该制剂中含有生物碱及生物碱盐、多糖及其甙类、有机酸等物质。采用紫外可见分光光度法对该制剂中的盐酸小檗碱、总多糖、总绿原酸进行了定量测定，结果表明，复方白毛藤注射剂盐酸小檗碱含量为1.44mg／ml，总多糖含量为37.7mg／ml，总绿原酸的含量为33.7mg／ml，用该方法测定样品上述有效成分含量结果准确，回收率高，变异系数符合要求，数据稳定。 以小白鼠为试验动物，采用改良寇氏法，计算该制剂的半数致死量(LD_(50))为19.5g／kg·bw，95％可信限为18.2～21.1g／kg·bw，按毒性标准判断为基本无毒制剂。以实验兔为对象，采用热原性试验法和刺激性实验法对复方白毛藤注射剂进行热原检查和刺激性检查，结果表明，该制剂无热原性和刺激性，以肌肉注射方法给药安全，可靠。 采用二倍稀释法进行了复方白毛藤注射剂的最小抑菌浓度和最低杀菌浓度的测定，结果表明：该制剂对链球菌、金葡菌、绿脓杆菌、沙门氏菌和大肠 湖南农业大学博士论文复方白毛藤注射剂有效成份及其药理作用研究 杆菌的最低抑菌浓度分别为一56 mg/ml，1 .56 mg/ml，12.5 mg/ml，12.5 mg/ml和 25.0 mg/ml。对链球菌、金葡菌、绿脓杆菌、沙门氏菌和大肠杆菌的最小杀菌浓 度分别为3.12mg/ml，3.12mg/ml，25mg/ml，25mg/ml及50mg/ml。采用杯蝶法 进行复方白毛藤注射剂及对照药物的体外抑菌试验，结果表明，该注射剂对链球 菌和金葡菌的抑菌效果与烟酸氟呱酸和林可霉素相当(P0.05)，高于痢菌净的抑 菌效果(P0.05)，对沙门氏菌、大肠杆菌和绿脓杆菌的抑菌作用弱于烟酸氟呱酸 的抑菌效果。体外抗病毒试验的结果表明，100 mg/ml的复方白毛藤注射剂具有显 著的抗鸡新城疫病毒和犬瘟热病毒作用，10 mg/ml剂量具有较明显的抗鸡新城疫 病毒和犬瘟热病毒作用。1 mg/ml则不具有抗鸡新城疫病毒和犬瘟热病毒作用。 为探讨复方白毛藤注射剂的药理作用，以小白鼠为试验动物，研究了不同剂 量的复方白毛藤注射剂对小白鼠白细胞总数，T淋巴细胞百分率，血液总蛋白(TP)、 血液球蛋白(GLO)含量及胸腺指数和脾脏指数的影响。结果表明，0.5 ml众g.bw 和1 mFkg.bw的剂量组均能提高小白鼠体内的白细胞总数，增加淋巴细胞百分率， 增加血液中TP、GLO含量及胸腺指数和脾脏指数，以上指标均明显高于对照组 (P0.01)，但两剂量组间无显著差异(P.05)。为了观察复方白毛藤注射剂对小 白鼠的免疫调节能力的影响，用不同剂量的该注射剂给小白鼠腹腔注射15d后， 采用常规方法测试小白鼠的各种免疫指标。结果表明，0.5 ml人g.bw和1 ml/kg.bw 均能明显增加ConA诱导的小白鼠脾淋巴细胞增殖能力，二硝基氟苯诱导的小白鼠 迟发性变态反应，小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬红细胞功能能力和碳粒廓清能力，两 处理组均显著高于对照组(P0.01)，两剂量组之间无显著差异(P.05)。 为研究复方白毛藤注射剂对鸡新城疫病毒(NDV)灭活疫苗免疫功能的影响， 以三黄雏鸡为试验动物，采用红细胞花环法测定了该制剂对鸡T淋巴细胞E花环 形成率，采用间接血凝法(HI)测定了该制剂对鸡NDV的抗体滴度，同时测定了 胸腺指数，脾脏指数和法氏囊指数，采用RT.PCR法测定了该制剂对白细胞介素一2 (IL一2)基因转录的影响。结果表明，0.5 ml/k g.bw和1 ml/kg·bw剂量组均能提高 T淋巴细胞E花环形成率，与对照组相比，28日龄差异显著(P0.05)，35一42日 龄，差异极显著(p0.01)，49日龄差异显著(p0.05);0.5 ml/kg·bw和1 ml/kg· bw剂量组均能提高鸡NDV抗体滴度，与对照组相比，21日龄差异显著(P0.05)， 湖南农业大学博士论文复方白毛藤注射剂有效成份及其药理作用研究 28一35日龄差异极显著(p0.01)，42一49日龄差异显著(p0.05);0.5 ml/kg·bw 和1 mFkg·bw剂量组对鸡的胸腺、脾脏和法氏囊均有一定的促生长作用，与对照 组相比，各脏器系数在28一35日龄差异显著(P0.05);复方白毛藤注射剂可促使 鸡IL一2基因转录增强，21日龄1 ml/k g.bw剂量组效果明显，28一35日龄，02 ml瓜g’bw，0.5ml/kg’bw和1ml/kg’bw三个剂量组均能显著增强鸡IL一2基因转录， 49日龄时，各剂量组促进鸡IL一2基因转录的作用呈现减弱趋势。 采用田间试验法进行了复方白毛藤注射剂对猪链球菌病、猪大肠杆菌病及鸡新 城疫病的临床疗效研究。结果表明，该制剂1 ml/kg·bw剂量组对仔猪链球菌病的 治愈率为93.7%，与青霉素治疗仔猪链球菌病的效?