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实时荧光PCR检测转基因农产品的研究

丁远杰  
【摘要】:据国际农业生物技术应用咨询服务中心(ISAAA)统计,2001年全世界转基因作物种植面积为5260万公顷,十多个国家已种植转基因作物,其中99%的转基因作物种植在美国、阿根廷、加拿大和中国,已批准商品化转基因作物有大豆、玉米、油菜、棉花、番茄、马铃薯、甜椒、西葫芦、木瓜、甜菜、香石竹、矮牵牛、亚麻、烟草、西瓜、菊苣等。据估计,用这些转基因作物生产加工的食品全世界有近万种。 对转基因产品的安全性,特别是转基因食品对人和动物的健康及对生态环境的影响,自转基因技术出现以来,就一直是世界各国及联合国等国际组织关心的焦点问题,先后出台了一系列的相关政策和规定,其中许多国家限制了转基因的最低含量,阈值大小从1-5%不等。这就要求对转基因产品进行检测,以明确其种类,确定是否为已批准的或已获得许可的转基因产品,以防止一些具有风险的转基因产品任意扩散,造成不可挽回的损失。我国也于2001年5月9日公布并实施《农业转基因生物安全管理条例》,并于2002年1月5日公布了农业转基因生物安全评价、标识和进口安全管理三个配套管理办法。目前全世界36个国家和地区出台了各种转基因产品有关的法律法规。 虽然联合国所属机构(FAO、WHO等)及一些地区性国际组织在召集建立世界统一的检测技术和方法标准,但由于对于转基因产品的安全性、风险管理措施及其它利益等方面的不一致,目前各国尚难达成一致的意见。 为了能有效地检测转基因产品,我们已收集了国内外已商品化的转基因作物品种的基因构建图,选择了能覆盖全部已商品化转基因品种的7个基因作筛选目标(35S、nos、nptⅡ、pat、bar、FMV、cry3A),设计了多条特异性引物和荧光探针,利用荧光PCR方法进检测,相对检测灵敏度达到0.1%。目前已建立了转基因荧光定性PCR检测体系及转基因大豆Roundup Ready~(TM)和转基因玉米Bt-176的荧 光定量检测体系。同时采用UNG去污染酶,将PcR产物污染的可能性降到最低。 为进一步确认所检基因,我们将部分PCR产物克隆到T一载体上,转化大肠杆菌DHS 。,筛选阳性克隆,经测序结果表明,扩增产物与GeneBank中的序列同源性达 99.9%以上.同时还克隆了两个全长基因做阳性对照。 本论文在国内首次建立了转基因荧光PCR检测方法,并与公司合作推出配套试 剂盒。这对今后进出口转基因产品的检测将产生深远的影响,并具有重要的现实 意义。


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