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茶黄素类分离纯化技术及其生理活性研究

丁阳平  
【摘要】:茶黄素类(Theaflavins, TFs)是影响红茶品质的关键因子之一,国内、外大量研究表明,其具有多种药理功能及保健功效,开发前景极为广阔。由于其分离纯化技术难度大,限制了它的进一步利用。为了解决这一技术难题,本文首先采用NKA大孔树脂富集TFs,效果明显,制得含量为85%的茶黄素类(主要为四种),得率14.38%。茶黄素单体分离是本文的关键,本研究首次选用聚酰胺为分离材料,对茶黄素进行薄层及柱层析分离。薄层分离研究表明,当展开剂为甲醇-丙酮-冰醋酸,其三者比为8:5:3,预饱和时间为20min时,对TFs的分离达到理想效果。前面七个峰的Rf值分别为:0.14、0.22、0.28、0.31、0.35、0.4、0.48。此研究表明聚酰胺对TFs的分离是可行的。在此基础上对茶黄素类进行柱层析分离,结果表明,当洗脱剂为甲醇-氯仿-丙酮-冰醋酸其比例为3:5:8:0.5时得到7个明显不同的色段。分别收集第四、第五、第六、第七色段,经检测(HPLC)发现,第四、第五色段仍有杂峰,第六色段为茶黄素单没食子酸酯(TF-3'-G),含量为85%,第七色段为茶黄素(TF),含量达93%。TF经进一步纯化,其含量超过98%。 由于柱层析对复杂产物的分离有限,本文对柱层析不能再纯化的第四、第五、第六色段,首次采用制备型高效液相色谱进一步分离,第四色段制备到表儿茶素没食子酸酯(ECG)和化合物3,第五色段得到ECG和TF-3-G,含量均超过98%,第六色段为TF-3'-G,其含量达到95%。 本文首次利用自制高纯TFs及其单体为材料,探讨其对唾液淀粉酶、脂肪酶与环氧合酶的作用,旨在研究茶黄素物质在减肥及抗炎方面的效果。结果发现:TFs在0.08mg/mL时对唾液淀粉酶的抑制作用达92.77%,单体TF-3'-G的为78.03%,TF的抑制作用更是达到98.74%。TFs及单体TF-3'-G有增强脂肪酶活性的趋势,在其浓度为0.6 mg/mL时使脂肪酶活性增加18.27%,而单体TF可抑制脂肪酶的活性,抑制率为20.12%。环氧合酶(包括COX-1和COX-2)是炎症介质PG的关键合成酶,TFs对它不产生影响。而单体TF、TF-3'-G则具有选择性抑制COX-2的作用,抑制率分别为65.52%和60.78%,而它们对COX-1不产生影响。以上研究表明茶黄素能作为脂肪代谢调节剂及新型抗炎药物开发。


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