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杜仲叶中绿原酸的提取、纯化研究

李光锋  
【摘要】: 杜仲(Eucommia ulmoides Oliver)是我国特有的一种落叶乔木,被列为国家二级保护植物。我国的杜仲资源十分丰富,主要分布在秦岭以南山地、湖南、云南、贵州、陕西等省区,其有效成分绿原酸具有显著的清热解毒、抗菌消炎、保肝利胆及提高机体免疫力等作用,具有良好的发展前景。近年来,国内对杜仲的研究主要集中于杜仲皮药材质量及化学成分研究以及绿原酸的粗提取分离研究,我国大部分厂家只能生产附加值很低、纯度在20—50%的杜仲绿原酸,高纯度的绿原酸分离纯化还存在许多问题,如生产成本高且得率低。因而,从杜仲叶中分离纯化获得高纯绿原酸,同时解决这些问题已迫在眉睫。 本文对从杜仲叶提取分离绿原酸进行了研究,其结果如下: 1.在文献基础上建立了绿原酸的液相色谱检测方法。 高效液相色谱检测条件是:色谱柱:KromasiLC_(18)(250×4.6mm,5μm);检测波长:328nm;流动相:水:甲醇:磷酸=75:25:0.4,流速:1mL·min~(-1);柱温:30℃。该方法灵敏度高,适合绿原酸的精确测定。 2.对绿原酸的稳定性进行了研究,结果表明绿原酸在60℃以内,4—6h较稳定。在碱性条件下易分解,在pH=3的酸性条件下最稳定,绿原酸在强光照射下不稳定,因此在绿原酸的提取分离中应尽量保持在酸性、避光条件下进行。 3.比较研究了绿原酸的提取溶剂和提取方法,结果发现提取溶剂水和加热提取较好。之后采用正交试验考察了温度、时间、固液比和颗粒度4因素,对加热提取工艺进行了优化,结果表明:温度65℃,提取时间60min,固液比1:25,颗粒度为40目时较好。 4.进行了绿原酸的柱层析优化条件的研究。通过对吸附剂、洗脱剂等进行比较研究,结果表明以KLFC—150,树脂为吸附剂、以乙醇为洗脱剂为最优条件,以此方法分离绿原酸,纯度和收率都较高,纯度达到56.67%,收率为78.3%。 5.采用结晶方法进一步对绿原酸粗品进行纯化的研究。对绿原酸的结晶试剂和结晶条件进行了优化研究,结果绿原酸结晶的最佳条件为:温度为4℃,pH值为3,结晶试剂为PA。通过此条件绿原酸的纯度可以达到95%以上。


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