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皱皮柑果皮中黄酮类化合物的提取、纯化及分离鉴定

张珉  
【摘要】: 皱皮柑属于柑橘(Citrus)地方品种,是一种药食同功的保健水果。黄酮类化合物是柑橘主要活性成分之一,具有抗炎、降血压、抗氧化、抗癌等生理活性。从皱皮柑果皮中分离提取黄酮类化合物,对于皱皮柑的深加工及其在医药、食品工业等领域的应用,具有重要的理论意义与实际应用价值。本文以皱皮柑为原料,系统研究了其果皮中黄酮类化合物的提取和纯化工艺,应用高速逆流色谱法分离制备了2种黄酮类成分单体,并对皱皮柑果皮中主要黄酮类成分进行了检测和含量分析。主要研究结果如下: 1皱皮柑果皮中总黄酮含量的测定 应用以芦丁为对照品的分光光度法来测定皱皮柑果皮中总黄酮的含量,该方法简单快速,为探索最佳提取和纯化工艺的指标控制提供了快速有效的评价方法。 2皱皮柑果皮中总黄酮的提取工艺研究 采用回流提取和超声辅助提取两种方法对皱皮柑果皮中总黄酮的提取条件进行了研究,通过单因素和正交试验确定了各自的最佳工艺条件。回流提取工艺条件为:回流时间60min、粒径20目(0.90mm)、温度为70℃、乙醇浓度40%、料液比为1:30,总黄酮提取率可达1.54%;超声辅助提取工艺条件为:超声时间20min、料液比为1:50、乙醇浓度50%、粒径40目(0.45mm)、温度为50℃,重复提取一次,总黄酮平均提取率为1.52%。 3皱皮柑果皮中总黄酮的纯化工艺研究 通过比较D101、X-5、NKA-9、AB-8 4种大孔吸附树脂对皱皮柑果皮总黄酮粗提物的静态吸附和解吸性能,选择了对总黄酮吸附能力较强,且容易洗脱的吸附树脂AB-8来纯化总黄酮。通过AB-8型树脂对果皮总黄酮的纯化工艺研究,初步得出了AB-8型树脂纯化总黄酮粗提物的最佳工艺条件:以浓度为2.9mg/mL的皱皮柑粗提液上样,上样后关闭柱底活塞,静态吸附30min后,先用3BV的蒸馏水淋洗柱子,除去水溶性色素和杂质,然后用50%的乙醇溶液以1.5BV/h的流速进行洗脱,洗脱剂用量为3BV,即可达到较好的纯化效果。在优化工艺条件下,样品纯度可达到15.45%,是纯化前的2.41倍。 4皱皮柑果皮中黄酮类成分单体的分离制备 应用高速逆流色谱法分离制备了皱皮柑果皮中的黄酮类成分。以乙酸乙酯-乙醇-水(体积比为4:1:5)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,在主机转速700 r/min、流速2.0 mL/min、检测波长280 nm条件下进行分离制备,所得流分经高效液相色谱检测,并经核磁共振氢谱、碳谱鉴定化合物的结构。结果表明,从皱皮柑果皮总黄酮粗提物中分离得到了新橙皮苷和柚皮苷,其纯度分别为98.95%和98.67%。 5皱皮柑果皮中主要黄酮类成分检测及含量分析 应用高效液相色谱法(HPLC)分析皱皮柑果皮中主要黄酮类成分,并与宽皮柑橘、甜橙、柚类果皮中主要黄酮类成分进行比较研究。通过对比柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷三种对照品的图谱,发现皱皮柑果皮中这三种物质都存在,成熟果皮中主要黄酮类成分为新橙皮苷,含量为10.79mg╱g.DW,其次为柚皮苷、橙皮苷,含量分别为1.32mg╱g.DW和0.43mg/g.DW;宽皮柑橘、甜橙、柚类果皮中均未检测出新橙皮苷。


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