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蝴蝶兰离体培养再生体系的建立与多倍体诱导的研究

刘亮  
【摘要】: 蝴蝶兰姿态婀娜,花色高雅,是一种具有重要观赏价值和经济价值的花卉,在世界各国广为栽培,具有广阔的市场前景。对于国内蝴蝶兰产业化的发展来说,建立和完善快繁技术是当务之急。本研究对三个蝴蝶兰品种的离体组织培养技术体系进行了研究,并以迷你系列蝴蝶兰为材料,以秋水仙素为诱变剂,对蝴蝶兰多倍体诱导和鉴定技术进行了研究,旨在建立蝴蝶兰多倍体诱导和鉴定技术体系。主要结果如下: 1.蝴蝶兰丛生芽快繁途径研究 以带腋芽花梗为外植体诱导丛生芽,对四种消毒灭菌处理、腋芽萌发诱导率、丛生芽增殖情况进行了比较。结果表明:先用70%的酒精处理30s,然后于0.1%HgCl_2+若干滴Tween—20的混合液中处理12min的消毒效果最好,成活率可达91.67%;1/2MS+BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L和1/2MS+BA6.0mg/L两种培养基的腋芽萌发诱导率均可达100%;将切割下来的花梗芽移接到1/2MS+BA3.0mg/L培养基中诱导丛生芽,约1个月后可诱导出丛生芽;经正交实验分析得知蝴蝶兰增殖培养的最适培养基配方为1/2MS+BA5.0~10.0mg/L+NAA0.5~1.0mg/L+葡萄糖(白糖)。 2.蝴蝶兰原球茎快繁途径研究 本部分探讨了暗培养、叶龄与取材部位、培养基配方几个方面对原球茎诱导的影响,通过实验可知,将叶块先在暗培养条件下培养14天后,再转至光照培养更有利于原球茎的诱导。幼嫩叶片更适合原球茎的诱导,而对于较大叶片则要进行切割才可诱导出原球茎,且以叶基部诱导率为最高。经正交实验分析可知改良MS+BA10.0mg/L+NAA1.0mg/L最适合原球茎诱导,而在1/2MS+BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L中原球茎增殖倍数为最大,可达7.40倍。 3.生根与壮苗 生根培养过程中在1/2MS培养基中只需添加一定量的NAA就可取得很好的效果。本实验中最适宜的蝴蝶兰生根壮苗培养基配方为1/2MS+NAA1.0mg/L。 4.蝴蝶兰试管苗的移栽和管理 当蝴蝶兰试管苗具3~4片叶,2~3条根时即可出瓶移栽。移栽前揭盖炼苗4~5天有利于提高移栽成活率。试管苗消毒用多菌灵处理10~20min或用高锰酸钾处理20min效果较好。通过对移栽基质的比较,发现水苔+泥炭+珍珠岩混合基质的移栽成活率最高,可达到100%。水培栽培蝴蝶兰试管苗成活率不高,仅为64.6%,但栽培的成熟苗长势较好,生长速度较基质栽培快。 5.蝴蝶兰多倍体的诱导 不同秋水仙素浓度和处理时间对蝴蝶兰幼芽的存活率和增殖率影响不同。秋水仙素处理浓度越高,处理时间越长,幼苗存活率和增殖率越低。当秋水仙素浓度为0.2%、处理时间为48h时存活率仅为60%,且没有新芽产生。 采用改良的卡宝品红染色压片法对蝴蝶兰染色体进行计数统计,结果发现经0.05%的秋水仙素处理24h的蝴蝶兰多倍体诱导率最高,可达20%,其中四倍体4株,嵌合体2株。除此之外,本试验还得到了两株八倍体植株。得到的四倍体(2n=4x=76)植株与二倍体(2n=2x=38)植株相比:叶片质地较厚,颜色较深,呈紫绿色,株型较大且生长旺盛;在相同大小显微镜视野内气孔大而气孔密度小。 通过上述研究,建立了蝴蝶兰快速繁殖技术体系和多倍体诱导及鉴定技术体系,为进一步开展蝴蝶兰染色体工程育种奠定了坚实的基础。


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