冬青苦丁茶微繁殖体系的建立

【摘要】： 为了建立冬青苦丁茶的高效繁育体系,本文以冬青苦丁茶茎段为外植体,研究了影响植株再生的因素及离体培养过程中的一些生理变化,结果如下: 1.以从广东、广西引进的冬青苦丁树茎段为材料,HgCl_2水溶液为消毒剂,进行了外植体材料灭菌研究,结果表明:0.25%HgCl_2浸泡18min,灭菌后存活率较高,能获得较好的灭菌效果。茎外植体的感染率从树冠上部至下部逐渐增大,2年生茎段明显高于当年生茎段。外植体通过培养后,再次灭菌效果不佳。因此在冬青苦丁茶的茎段组织培养中,宜取树冠上部当年新生枝条作为外植体,可以大大减少感染率。 2.探讨不同部位新梢、不同基本培养基、不同激素组合以及不同季节取材对其愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明:①以树冠中、上部新梢茎段作外植体较好,愈伤组织诱导率较高。②基本培养基MT、MS的愈伤组织诱导率较高,且生长良好;优于B5、改良White培养基。③培养基MT+6-BA 0.05mg/L+2,4-D 0.5mg/L上愈伤组织生长旺盛,结构致密。④春季材料的愈伤组织诱导率及其生长状况优于其他季节。⑤在培养基MT+6-BA0.05mg/L+2,4-D0.5mg/L上诱导的愈伤组织置于培养基MT+6-BA 1mg/L+NAA0.01mg/L上培养的愈伤组织,分化出了球形胚,但未能进一步分化出芽、根。 3.以冬青苦丁茶树幼梢茎段为外植体进行腋芽增殖培养的结果表明:①MT+BA1mg/L+2,4-D 0.05mg/L培养基培养的外植体,腋芽萌发较快,萌发率最高。②外植体随着木质化程度的增加,褐变率降低,萌动时间缩短,萌动率提高。③5、8、10月份取材的外植体,腋芽萌动所需时间随月份的增加而延长,萌动率降低。④MT+BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L培养基能使试管小苗快速增殖。⑤试管苗在1/2MT+NAA 0.1mg/L+IBA 0.2mg/L培养基上短时间培养后,蛭石上扦插发根,能较容易移栽成活。 4.植株遭冻害后萌发的新梢与正常萌发的新梢的生理状态存在显著差异。冻害后的外植体在MT+BA 1mg/L+2,4-D 0.05mg/L或MT+BA 1mg/L+IBA 0.05mg/L培养基上培养,腋芽萌动率较高,而在MT+BA0.5mg/L+IBA 0.05mg/L或MT+BA BA0.5mg/L+2,4-D 0.05mg/L培养基上培养的腋芽萌动率显著降低。而冻害前的试验表明,在MT+BA 0.5mg/L+2,4-D 0.005mg/L或MT+BA 0.5mg/L+IBA 0.05mg/L培养基上培养,腋芽萌动率较高。可能植株遭冻害后,细胞分裂素合成量较少,或枝梢内细胞分裂素和生长素的比例改变所致,其机理有待进一步研究。 5、分析了耐寒性不同的冬青苦丁单株、试管苗茎、叶和愈伤组织的蛋白质、POD同工酶。结果表明:蛋白质谱带数量越多的单株,其抗寒性越强,反之抗寒性越弱;抗寒性强的单株存在POD同工酶谱带4,反之则无。大田栽植的苦丁茶树嫩梢、试管苗的蛋白质谱带基本相同,而愈伤组织的蛋白质谱带与之相比,谱带数较少。