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荷叶黄酮类化合物分离纯化技术研究

黄甜  
【摘要】: 荷叶是传统莲产业中的副产品或废弃物,资源丰富。国内外研究表明,荷叶中含有荷叶黄酮、荷叶生物碱等多种生理活性成分,并显著具有激活激素敏感性脂肪酶活性、促进脂肪细胞中甘油三酯水解、降低血液中胆固醇含量、抑制动脉粥样硬化、减肥瘦身、强身健体等作用。1991年,我国卫生部将荷叶列为“既是食品又是药品”的植物名单之中。目前我国对荷叶黄酮、生物碱的研究尚处在探索化学成分及其含量、试验条件下提取黄酮类、生物碱类粗提物以及它们的药理功能等方面,并且以荷叶生物碱居多。受研究手段、技术条件等限制,对荷叶黄酮类化合物的研究未能取得突破性进展。集成柱色谱分离、高速逆流色谱分离、结构鉴定与含量分析等先进技术,制备荷叶黄酮高纯品或单体,并以此作为基础,开展荷叶黄酮药理功能与应用研究,将是荷叶黄酮类化合物高值化利用发展趋势。 本研究以荷叶黄酮粗提物为试验材料,在构建荷叶黄酮总量的紫外检测方法与荷叶黄酮化合物的HPLC检测方法的基础上,比较研究了XAD-16、DM-130、HP-20、AB-8、D-101五种大孔吸附树脂对荷叶黄酮的静态吸附与解吸性能,筛选并优化了最佳树脂的动态吸附与解吸参数,并通过高速逆流色谱溶剂体系筛选、操作参数的优化等,制备了部分荷叶黄酮高纯品或单体,为荷叶黄酮类化合物的工业化生产及推广应用提供了科学依据,主要研究结果如下: 1.荷叶黄酮检测方法的建立:①硝酸铝络合分光光度法:510 nm检测波长,精密度RSD为0.21%、稳定性RSD为5.24%、重复性RSD为0.36%、回收率RSD为1.69%,说明该方法准确、可用;②高效液相色谱法:色谱柱:Kromasil C18 (150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸,洗脱梯度:0.01 min(10: 90)-10 min(10:90)-30 min (15:85)-60 min(35:65)-70 min(10:90);柱温:30℃;UV检测,检测波长:360 nm和254 nm,在此条件下,能使荷叶中各种黄酮类化合物的峰得到有效分开。 2.大孔吸附树脂分离纯化荷叶黄酮类物质研究:以荷叶黄酮总含量为5.46%的粗提取物为原料,对XAD-16、DM-130、HP-20、AB-8、D-101树脂进行静态吸附和解析,根据其吸附能力及解吸量确定所选树脂型号为HP-20,吸附率为79.86%,解析率为65.39%,效果最好。动态吸附与解吸试验结果表明,影响树脂分离纯化荷叶中黄酮类物质效果的主要因素先后是:洗脱梯度洗脱体积上样量流速,采用上样量40g、流速2 BV/h、乙醇浓度60%、洗脱体积3 BV等参数进行荷叶黄酮类化合物的分离纯化,荷叶总黄酮得率为87.78%,纯度为43.83%,纯度提高8.03倍,显著优于文献资料报道的结果。 3.高速逆流色谱分离纯化荷叶黄酮类化合物:采用乙酸乙酯-甲醇-水(4:1:3)溶剂系统以及转速850 r/min、固定相流速20 mL/min、流动相流速1.5mL/min、检测器波长254 nm等操作参数,可有效分离纯化两种纯度不低于98%的荷叶黄酮化合物,此方法安全、快捷,有效。 综上所述,本研究所建立荷叶黄酮高效液相色谱检测方法、大孔吸附树脂初步分离的得率与纯度以及应用高速逆流色谱分离纯化荷叶黄酮类化合物等方面,与同类研究相比,具有较好的创新性和参考价值。


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