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广西莪术挥发油GC-MS指纹图谱的构建及其谱效关系的研究

曾建红  
【摘要】:本学位论文利用气相色谱.质谱联用仪(GC-MS)分析技术对广西道地产区的10批次广西莪术样品进行比较分析,采用国家药品监督管理局推荐的“中药色谱指纹图谱计算机相似性评价系统”进行模式分析及相似度计算,建立了广西莪术油GC-MS特征指纹图谱,得到广西莪术油GC-MS指纹图谱特征峰面积值;以不同浓度的广西莪术油分别处理鼻咽癌CEN-2细胞,噻唑蓝(MTT)法检测莪术油对CNE-2细胞的毒性和不同浓度的莪术油对CNE-2细胞生长增殖抑制作用;Hochest33342荧光染色法观察凋亡细胞的发生及形态学变化,流式细胞术检测其凋亡率,蛋白免疫印迹法检测核转录因子κB (NF-κB)蛋白的表达;将获得的10批次不同产地的广西莪术油特征峰面积值和莪术油对鼻咽癌CEN-2细胞的增殖抑制率进行灰关联度分析,对原始数据进行规格化,根据规格化值计算参考数列与比较数列的绝对差值、各特征峰与对肿瘤细胞的增殖抑制率的关联系数、各特征峰与对肿瘤细胞的增殖抑制率的关联度。结果如下: (1)通过GC-MS检测了广西莪术油含有52种化学成分,鉴定了39种成分,主要为萜类及倍半萜衍生物;广西莪术油指纹图谱检测出20个共有特征峰,特征峰峰面积之和占总峰面积的93.0%以上,10批次样品具有较高的相似度(0.90);10批次广西莪术油的指纹图谱中各特征成分均得到了较好分离,具有特征性和唯一性。 (2)莪术油对鼻咽癌CNE-2细胞有较强的体外细胞毒性作用,明显的抑制鼻咽癌CNE-2细胞的生长,存在着剂量.时间-效应的关系;莪术油能诱导鼻咽癌CNE-2细胞NF-κB的凋亡,其分子机制之一可能是通过下调NF-κB的表达,从而达到抑制鼻咽癌细胞的增殖,促进凋亡,发挥抑制肿瘤生长的作用。 (3)莪术油中主要的抗肿瘤活性成分为莪术醇、莪术二酮、β-榄香烯、吉马酮、莪术酮,其中莪术醇与肿瘤细胞抑制作用具有高度关联(关联度0.90),莪术二酮、β-榄香烯、吉马酮、莪术酮与肿瘤细胞抑制作用的关联度均在0.70以上。其它各特征峰代表的化学成分与其增殖抑制作用的关联度均在0.60-0.80之间;依据关联度的大小,各成分对抗肿瘤作用贡献的大小顺序为:莪术醇莪术二酮β-榄香烯吉马酮莪术酮α-丁子香烯δ-瑟林烯β-石竹烯β-榄香烯酮a-蒎烯α-石竹烯桉油素樟脑2-壬醇异龙脑莪术烯δ-榄香烯莰烯D-柠檬烯龙脑。广西莪术抗肿瘤作用是其“有效组分群”共同作用的结果。 本研究建立了广西莪术油GC-MS指纹图谱,确定了广西莪术油“有效组分群”指纹特征对药效贡献的大小,这为中药的“谱效关联”的指纹图谱的建立、中药的质量控制和药效评价标准的制定提供了新的思路和方法。


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