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单面针药用成分HPLC指纹图谱及其质量评价研究

王丽美  
【摘要】:中药材单面针(学名蚬壳花椒Zanthoxylum dissitum Hemsl)为芸香科花椒属植物,能祛风活络、散瘀止痛、解毒消肿,是许多中成药组方中的主要成分,具有良好的发展前景。目前,单面针完全处于野生状态,随着需求量的增大,单面针野生资源逐年减少,正面临着资源匮乏与生态破坏的双重危机。为更好的开发利用这一中药,控制其质量,本课题对单面针的质量进行了系统的研究,主要研究结果如下: (1)建立了一种测定单面针药材中白鲜碱含量的高效液相色谱(HPLC)分析方法。以产于湖北恩施、湖南张家界和贵州铜仁3个主产区的单面针和经人工快繁栽培于长沙的单面针为材料,采用超声波辅助提取,色谱柱为SinoChrom ODS-BP C18柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液(50:50)为流动相,流速0.8mL/min,在波长236nm处进行白鲜碱含量检测。方法简便易行,数据可靠,为单面针药材的质量检测标准提供了一种科学的、可行的检测方法。 (2)单面针药材HPLC指纹图谱方法的建立。以单面针为研究对象,详细考察了其药用部位的色谱分离条件,包括供试品溶液制备、色谱条件等影响因素,初步确定了单面针药材的HPLC指纹图谱的建立方法,以80%甲醇溶液为提取溶剂,超声波震荡30min,制备单面针药材样品溶液;选用Agilent Eclipse XDBC18柱色谱柱,以水+0.1%TFA (A)-乙腈(B)为流动相,按非线性梯度洗脱条件:0~35min,8%~35%A;35~50min,35%~70%A;50~65min,70%~80%;65~70min,80%-8%,进行梯度洗脱,选检测波长254nm,流速为0.8mL/min,并通过精密度、重复性、稳定性实验进行验证。 (3)不同产地单面针HPLC指纹图谱的建立。按照确定的指纹图谱建立方法,对13批单面针药材进行测定,初步建立了单面针药材指纹图谱,确定其中的16个共有峰作为指纹图谱的特征组成,并生成了单面针指纹图谱的共有模式。采用相似度作为指纹图谱的评判参数,计算了不同批次间的相似度,相似度在0.30-0.974之间,表明不同产地的单面针样品中化学成分的组成基本一致,但组分的量上存在一定的差异。对不同产地单面针样品的指纹图谱进行聚类分析和主成分分析,二者分析结果基本一致,表明指纹图谱技术结合聚类分析和主成分分析是评价不同产地单面针的有效方法之一,可为单面针的质量控制提供更全面的参考。 (4)不同来源单面针HPLC色谱图的比较。首先对不同产地的单面针进行分析,结果表明,长沙、恩施、铜仁、广西、张家界五个产地的单面针样品HPLC图谱主要峰群的整体面貌基本一致,但各色谱峰的峰高或响应值有较大差别;从化学成分的总体含量上分析,恩施和铜仁的整体品质较差,长沙次之,南宁和张家界产单面针品质最好。其次以单面针的根部、茎部及叶(嫩叶、老叶)为研究对象,初步探讨了HPLC色谱图的不同。叶中更多的含有水溶性或极性较大的成分而根部、茎部更多的含有脂溶性或是极性较小的成分;茎部与根部指纹图谱相似,化学成分相似只是含量远低于根部。最后分析比较了单面针根部直径大小与HPLC色谱图的差异的相关性,其色谱峰数量、峰面积大小差异并不简单的随根部直径的增加而呈现增加或减少的趋势,平均直径2.5cm的根部有效成分的种类和含量都较多,整体质量最优。


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