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ω-3多不饱和脂肪酸对日本血吸虫病肝纤维化的保护作用及其机制研究

吴媛  
【摘要】:目的:利用小鼠血吸虫病肝纤维化模型,观察ω-3多不饱和脂肪酸对日本血吸虫病肝纤维化过程中炎症反应启动和消退过程的影响,分析肝纤维化指标,检测肝细胞存活状况和肝细胞功能预后状况,从而评价ω-3多不饱和脂肪酸对日本血吸虫病肝纤维化的干预效果及护肝作用,为日本血吸虫病的治疗提供新思路、新途径。 方法:用日本血吸虫尾蚴(20±条/只小鼠皮肤敷贴)感染昆明小鼠,然后随机分为3组:感染模型组(A组,10只),吡喹酮单独治疗组(B组,10只),ω-3多不饱和脂肪酸加吡喹酮混合治疗组(C组,30只)。其中C组又分为可溶性虫卵抗原释放入血前(感染后第12天,即C_1组)、入血时(感染后第35天,即C_2组)、入血后(感染后第42天,即C_3组)给予ω-3多不饱和脂肪酸治疗(每只小鼠每天2ml/kg尾静脉注射,连续7天)三小组。B、C两组40只小鼠均于感染后第25天起灌胃吡喹酮(每只小鼠每天500mg/kg,连续2天)。另设正常对照组(D组)(10只)。感染后第60天将各组小鼠断颈处死取眼球血及肝脏、脾脏。用苏木素-伊红(HE)及Masson胶原纤维染色观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿面积及肝脏胶原沉积情况,竞争放射免疫法检测血清透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)含量,用免疫组化技术评价肝脏组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析血清γ-干扰素(INF-γ)、白介素-13(IL-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,用流式细胞术检测脾脏T细胞增殖程度。 结果:肝组织切片HE染色及Masson胶原纤维染色观察到ω-3多不饱和脂肪酸加吡喹酮混合治疗组(感染后第12天开始给ω-3多不饱和脂肪酸,即C_1组)较感染模型组(A组)、吡喹酮单独治疗组(B组)肝虫卵肉芽肿面积及肝脏胶原沉积明显减少;C_1组炎症介质TNF-α、IL-13水平(0.27±0.02pg/μl,71.08±6.21pg/μl)均低于A组(0.67±0.04pg/μl,129.77±8.34pg/μl)和B组(0.38±0.03pg/μl,90.41±5.51pg/μl),而INF-γ则相对增高(C_1组:0.54±0.03pg/ml,A组:0.17±0.02pg/ml,B组:0.42±0.02pg/ml)(P0.01);C_1组肝纤维化指标(HA、LN)(822.35±69.62ng/ml,1233.07±42.69ng/ml)较A组(1735.85±141.49ng/ml,1871.83±52.96ng/ml)和B组(1061.96±144.68ng/ml,1400.74±32.24ng/ml)显著降低(P0.01);在α-SMA表达上,C_1组较A组和B组明显减弱;C_1组CD4~+Tcell占脾总细胞的百分比较正常组(D组)降低,有统计学意义(P0.05),C_1组与感染模型组(A组)、吡喹酮组(B组)比较无明显差异;各组CD8~+Tcell占脾总细胞的百分比改变无明显差异。感染后第35天开始给ω-3多不饱和脂肪酸加吡喹酮混合治疗组(即C_2组)及感染后第42天开始给ω-3多不饱和脂肪酸加吡喹酮混合治疗组(即C_3组)与吡喹酮单独治疗组比较,所有的检测指标均无明显差异。 结论:可溶性虫卵抗原释放入血前,在吡喹酮治疗的基础上加用ω-3多不饱和脂肪酸,能明显降低日本血吸虫虫卵肉芽肿炎症反应和肝纤维化程度,其机制与ω-3多不饱和脂肪酸具有抗炎、促炎症消退以及免疫调节作用有关;ω-3多不饱和脂肪酸的抗日本血吸虫虫卵肉芽肿和肝纤维化的作用的实现与其给药时间有关。


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