β-榄香烯对膀胱癌T24细胞增殖及MTA-1基因表达的影响

【摘要】：目的:研究β-榄香烯对膀胱癌T24细胞增殖及其对MTA-1基因表达的影响,探讨β-榄香烯诱导膀胱癌细胞凋亡及其可能机制,为进一步研究β-榄香烯的抗癌作用和临床应用β-榄香烯提供实验依据。 方法:体外培养T24细胞,以浓度分别为0.004mg/ml、0.008mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml的β-榄香烯分别作用T24细胞24h、48h和72h,应用MTT方法测定各组β-榄香烯对膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用;运用IC50软件计算出高于IC50所用的最低浓度β-榄香烯,以此浓度的β-榄香烯作用T24细胞24h、48h、72h,分别运用Western-blot、RT-PCR法检测对MTA-1蛋白和MTA-1mRNA表达水平的影响;应用光镜观察各组膀胱癌细胞形态学的改变。并设置浓度为0mg/mlβ-榄香烯作为对照组。 结果: MTT比色法结果显示:对T24细胞的抑制率在50﹪以上的最低浓度β-榄香烯为0.02mg/ml;其它各处理组不同浓度的β-榄香烯均能抑制T24细胞生长,并且T24细胞的成活率随β-榄香烯的浓度增加和作用时间的延长而降低,存在剂量和作用时间依赖性。以0.02mg/ml浓度β-榄香烯作用T24细胞24h、48h和72h, Western-blot检测各组MTA-1蛋白表达相对值分别是(0.845±0.014),(0.667±0.016),(0.478±0.018),与对照组(0.975±0.016)比较差别有显著性(P0.05),而各处理组组间比较差别有显著性(P0.01);RT-PCR检测各组MTA-1mRNA表达相对值分别是(0.867±0.005),(0.797±0.004),(0.717±0.007),与对照组(0.992±0.009)比较差别有显著性(P0.05),而各处理组组间比较差别有显著性(P0.01),这些结果显示β-榄香烯能够降低T24细胞中MTA-1蛋白和MTA-1mRNA的表达,并呈时间依赖性。以0.02mg/ml浓度β-榄香烯作用T24细胞24h、48h和72h,光镜观察各处理组T24细胞形态结果显示:随着0.02mg/ml浓度β-榄香烯作用时间的延长,细胞形状逐渐变为圆形或不规则形,数量增多,贴壁能力下降,表面出现发芽现象,细胞体积明显缩小,胞浆浓缩,胞核比例明显变小,出现单层细胞漂浮、掀起,部分细胞崩解成碎片,或失去了细胞正常形态。 结论:β-榄香烯能明显抑制膀胱癌T24细胞的生长和增殖,可诱导膀胱癌T24细胞凋亡。其机制可能与下调膀胱癌T24细胞MTA-1蛋白和MTA-1mRNA的表达有关。