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Caveolae/Caveolin-1参与CGRP对氧化损伤HUVECs的保护作用

周孝钱  
【摘要】:目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对过氧化氢(H2O2)诱导的离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用,观察caveolae/caveolin-1对CGRP保护作用的影响。 方法:0.1%FBS的培养基同步化细胞24h;分别用CGRP和H2O2孵育细胞,观察CGRP对H2O2损伤细胞的保护作用;5mmol/Lβ-环糊精(β-cyclodextrin,β-CD)预孵育细胞30min破坏caveolae结构,观察caveolae对CGRP保护作用的影响;噻唑蓝比色法(MTT)观察HUVECs活力;Western-blot检测caveolin-1表达。PI单染流式细胞术观察HUVECs周期分布情况。 结果:①CGRP(1~100nmol/L)能浓度依赖性的提高HUVECs活力;H2O2 (0.2~1.0mmol/L)则浓度依赖性的降低HUVECs活力;10、100nmol/L CGRP预孵育HUVECs 30min能明显提高氧化损伤HUVECs的活力(P﹤0.05)。②与0.1%FBS组比较,100nmol/L CGRP孵育细胞降低caveolin-1表达水平(P﹤0.05); 0.5mmol/LH2O2则使细胞caveolin-1水平上升(P﹤0.05);100nmol/L CGRP预孵育HUVECs30min能显著降低氧化损伤HUVECs caveolin-1表达水平(P﹤0.05)。③破坏caveolae结构后,增强CGRP拮抗氧化损伤引起的HUVECs活力下降的效应(P0.05),胆固醇能够削弱这种增强效应(P0.05)。④破坏caveolae结构增强CGRP下调HUVECs caveolin-1表达的作用(P0.05);预加入胆固醇后,该作用被削弱。⑤与正常组比较,CGRP使HUVECs S期细胞数明显增多,H2O2使HUVECs S期细胞数明显减少;CGRP预孵育细胞,增加氧化损伤HUVECs S期细胞数,提高氧化损伤HUVECs PI值;破坏caveolae结构增强CGRP增多氧化损伤HUVECs S期细胞数目的作用;预加入胆固醇,PI值减小,该增强作用受到抑制。 结论:1.CGRP对H2O2诱导损伤的HUVECs有一定的保护作用,其机制可能与下调氧化应激导致的caveolin-1的表达有关。 2.破坏caveolae结构能增强CGRP对H2O2诱导损伤HUVECs的保护作用。


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