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DATS通过ROS活化MLK3-JNK诱导HL-60细胞凋亡

崔泽文  
【摘要】: 目的:探讨DATS诱导HL-60细胞凋亡的分子机制,并探讨活性氧在JNK活化过程中的作用。 方法:用浓度为50、100、150μM的DATS处理HL-60细胞0、0.5、1、3、6、12h,或用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)预孵育HL-60细胞30min后,再用浓度为100μM的DATS处理HL-60细胞0、0.5、1、3、6、12h,流式细胞术检测细胞内的ROS水平;蛋白印迹法检测MLK3、JNK的磷酸化水平;Hoechst染色观察细胞的凋亡形态变化和DNA Ladder检测细胞凋亡;用MLK特异性阻滞剂CEP-1347预处理后,观察100μM DATS处理细胞3h后蛋白p-JNK的表达变化。 结果:不同浓度DATS处理HL-60细胞不同时间后,细胞流式检测显示ROS的产生与DATS处理呈时间剂量依赖关系,在0.5-3h随着DATS处理时间和浓度的升高而升高,ROS的荧光强度在3h、150μM时达到最高峰(为89.7±3.67),其后维持在一个较高水平。 DATS处理HL-60细胞3h,开始出现细胞凋亡与DNA断裂,6-24h时,细胞出现明显的核固缩,核崩解,明显的DNA梯度等凋亡表现,用ROS阻断剂NAC预处理后,Hoechst染色和DNA Ladder分析均未出现凋亡的表现。DATS能诱导HL-60细胞MLK3磷酸化水平显著升高,NAC能显著下调HL-60细胞MLK3的磷酸化水平,MLK特异性阻滞剂CEP-1347能显著抑制DATS诱导的JNK磷酸化。 结论: 1. DATS诱导HL-60细胞产生ROS并介导MLK3和JNK活化 2. DATS诱导的MLK3/JNK活化与HL-60细胞凋亡有关。


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