Survivin反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞HSC-T6凋亡的影响

【摘要】： 目的:通过survivin反义寡核苷酸(Antisense Oligodeoxynucleotides,ASODN)转染HSC-T6细胞株,研究其对HSC-T6细胞株凋亡的影响。 方法:实验分为空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组、ASODN组(400nmol/ L、800nmol/L、1000nmol/L)。脂质体介导survivin寡核苷酸转染HSC-T6细胞24小时后,倒置荧光显微镜下观察转染效率。Survivin寡核苷酸转染HSC-T6细胞48小时后,通过RT-PCR、western-blotting检测survivin基因表达的改变,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,PI单染流式细胞仪测定细胞凋亡率。 结果:转染24小时后,于倒置荧光显微镜下观察发现:ODN各浓度组细胞内均可见到清晰的绿色荧光,转染效率均达到80%;转染作用48小时后,RT-PCR及werstern-blot结果显示:与空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组比较,ASODN各浓度组survivin mRNA及蛋白表达量均低于各对照组(p0.01);ASODN各浓度组survivin mRNA及蛋白表达量组间比较,均有统计学意义(p0.01),空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组组间比较无统计学差异(p0.05)。在倒置显微镜下观察发现ASODN各浓度组细胞出现明显的凋亡现象;PI单染流式细胞仪检测显示:与空白组、脂质体、1000nmol/LSODN组比较,ASODN各浓度组细胞凋亡率明显提高(p0.05);ASODN各浓度组凋亡率组间比较,均有统计学差异(p0.01)。空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组组间比较无统计学差异(p0.05)。 结论:1、HSC-T6细胞高表达survivin; 2、Survivin ASODN能抑制survivin基因的表达和诱导HSC-T6细胞的凋亡。