益气解毒方对鼻咽癌细胞骨架结构及相关蛋白表达活性的干预效应研究

【摘要】：目的： 观察益气解毒方对鼻咽癌细胞骨架结构及相关蛋白系统表达活性的影响,探讨其对鼻咽癌细胞转移潜能相关生物力学特性干预效应及其影响细胞迁徙运动潜能的可能作用机制,为寻找干预鼻咽癌细胞转移的新靶点提供实验依据。 方法： 32只BALB/c裸小鼠,随机分为模型组、益气解毒方治疗组、益气解毒方预防组和甲氨蝶呤阳性对照组,分别按照给药方案用药,取人鼻咽癌细胞株CNE2对数分裂期细胞,分别于各组动物右侧前腋皮下接种,以制备移植瘤模型,动态观察各组裸鼠移植瘤生长情况,测量移植瘤长短径,绘制移植瘤生长曲线；观察期满后处死动物,取瘤体称重,分别计算抑瘤率,切取标本分别制备石蜡包埋块及电镜标本。部分瘤体石蜡包埋块连续切片,常规苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察病理组织学变化。部分瘤体透射电镜观察各组标本细胞骨架结构系统微管、微丝与中间丝等的形态变化,比较各组的差异。 免疫组化SABC法检测各组标本Cdc42、β-tubulin、F-actin、Ezrin表达活性,比较其组间差异。 结果： 各用药组裸鼠移植瘤体积与模型组相比较相对较小,差异均具有统计学意义(P0.05)；3组的裸鼠抑瘤率分别为益气解毒方预防组58.35%、益气解毒汤治疗组30.03%、阳性对照组52.94%。 移植瘤组织的光镜观察显示,模型组瘤细胞排列密集甚至重叠,结构尚清晰。用药各组瘤细胞固缩,密度增加,轮廓变形,出现不同程度的凋亡。其中预防组可见凋亡小体。电镜显示各用药组瘤细胞较模型组细丝状骨架纤维有不同程度破坏,其中益气解毒方预防组瘤细胞胞质骨架稀疏,骨架纤维短且细碎,排列无极向,少见应力纤维束。 裸鼠移植瘤细胞骨架相关蛋白免疫组化SABC法检测显示,模型组与各用药组比较,其Cdc42、β-tubulin、F-actin、Ezrin表达活性较高,差异具有统计学意义(P0.01),各组组间比较益气解毒方治疗组与阳性对照组差异无统计学意义(P0.05),其余各组差异均有统计学意义(P0.01)。 结论： 益气解毒方可通过抑制Cdc42蛋白的表达,诱导下调CNE2细胞Ezrin蛋白、骨架微丝蛋白F-actin及微管蛋白β-tubulin表达活性,破坏瘤细胞内的纤维状骨架,抑制而发挥其迁徙运动潜能的效应。