补肾解毒法与健脾解毒法对乙肝病毒感染不同状态下免疫细胞功能影响的机理研究

【摘要】：目的： HBV感染后免疫紊乱/缺陷导致HBV不能被清除是慢性乙型肝炎难以治愈的关键原因,清除HBV并达到免疫学应答是治疗的最终目标。通过免疫学恢复治疗慢性乙型肝炎是中医疗法的主要机制。本研究拟以慢性HBV感染患者外周血树突状细胞(DCs/DC)、T细胞体外培养的细胞模型,运用中药血浆药理实验方法,比较补肾解毒和健脾解毒法对慢性乙型肝炎免疫清除期和免疫耐受期不同免疫状态患者的外周血DCs与T细胞功能的影响,研究补肾解毒还是健脾解毒治疗是提高HBV慢性感染后免疫细胞功能、恢复免疫学应答,治疗慢性乙型肝炎的主要方法,为临床提高中医治疗慢乙肝的疗效提供思路和研究基础,为进一步研究开发中药新药提供一定的指导方向与实验依据。 方法： 本研究分别从HBV慢性感染不同状态患者外周血来源的PBMCs进行体外分离诱导培养DCs与T细胞,采用补肾解毒与健脾解毒复方中药药物血浆分别对DCs与T细胞进行体外干预,应用流式细胞技术检测DCs的表面分子HLA-DR、CD80、CD86、CD1a的表达,以及T细胞表面分子CD28的表达,并用ELISA试剂盒检测DCs上清液中IFN-α分泌水平,观察比较二种复方中药药物血浆干预前后外周血免疫细胞功能的变化。 结果 1、慢性HBV感染免疫耐受期和免疫清除期患者外周血DCs培养至第7天,收获时DCs细胞数量较健康对照组显著减少(P0.05),且免疫耐受组较免疫清除组减少(P0.05)。 2、慢性HBV感染免疫耐受期和免疫清除期患者DCs表面的共刺激分子CD80、CD86的表达率、分泌细胞因子IFN-α的能力,以及T细胞CD28的表达率均明显低于健康人(P0.05)。 3、补肾解毒药物血浆(10%六甘中)、健脾解毒药物血浆(10%四甘小)干预后,DCs部分表型与T细胞CD28分子表达率升高,说明两种治疗方法均有一定效果(P0.05),且六甘中组的DCs表型表达率测定值的提高要高于四甘小组(P0.05)。 4、经含药血浆干预后,用ELISA法分别检测含药血浆加入前后培养上清中的IFN-α水平,各组DCs分泌IFN-α水平提高,但与干预前比较无显著性差异(P0.05)。 结论 1慢性HBV感染免疫耐受期和免疫清除期患者外周血DCs数量上较健康人明显减少,且以耐受期减少更加显著。 2慢性HBV感染免疫耐受期和免疫清除期患者DCs与T细胞存在免疫功能低下,进一步证实HBV慢性感染免疫耐受机制与机体细胞免疫功能紊乱或缺陷有密切联系 3补肾解毒和健脾解毒法对慢性乙型肝炎免疫清除期和免疫耐受期患者的外周血DCs与T细胞功能的恢复具有一定的作用,补肾解毒法在一定程度上对慢性HBV感染免疫耐受期患者细胞免疫学功能的影响更为显著。