超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道微生物的影响研究

【摘要】：目的：研究小鼠脾虚便秘造模对肠道微生物、酶活及血常规的影响,为脾虚便秘的治疗提供基础；观察超微铁皮石斛对脾虚便秘的疗效,探明超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道微生物、酶活性和血常规的影响,及对脾虚便秘肠道细菌和乳酸杆菌多样性的影响,为其疗效机理提供依据。 方法：采用灌胃番泻叶水煎液7d,然后控制饮食,饥饱失常喂养8天；正常组灌胃等量的无菌水7d后再正常喂养8天；共15d,制备小鼠脾虚便秘模型。造模成功后,分析小鼠体重、肠道菌群和酶活性；通过眼球采血,用CA-500血液自动分析仪进行血常规检测。 制备小鼠脾虚便秘模型,治疗组分别灌胃给药铁皮石斛传统汤剂、铁皮石斛超微全量汤剂、铁皮石斛超微50%量汤剂、铁皮石斛超微25%量汤剂和四磨汤口服液,正常组和模型组灌胃等量无菌水,共治疗7d,然后采集肠道内容物分析肠道菌群及酶活；正常组、模型组、铁皮石斛传统汤剂组和铁皮石斛超微50%量汤剂组均通过眼球采血,用CA-500血液自动分析仪进行血常规检测。 制备小鼠脾虚便秘模型,铁皮石斛传统汤剂组和铁皮石斛超微50%量汤剂组治疗组分别灌胃给药7d,正常组和模型组灌胃等量无菌水,采集肠道内容物,提取肠道微生物宏基因组,经细菌通用引物和乳酸杆菌特异引物PCR扩展后进行其多样性(?)RDRA分析。 结果：脾虚便秘造模后,模型组小鼠体重、体重变化率均显著小于正常组(P0.05或P0.01)；肠道细菌总数显著小于正常组(P0.01),大肠杆菌、乳酸菌、双歧杆菌数和真菌均显著大于正常组(P0.05或P0.01)；肠道淀粉酶和蛋白酶活性显著低于正常组(P0.05或P0.01),木聚糖酶和纤维素酶则显著高于正常组(P0.01)。脾虚便秘造模使得小鼠血小板数量及平均体积均显著小于正常组(P0.05),白细胞数量显著大于正常组(P0.05),其余各项指标均与正常组差异无统计学意义(P0.05)。 造模成功的脾虚便秘小鼠经铁皮石斛治疗后,模型组脾虚便秘症状无显著改善,体重变化和体重变化率较正常组低,肠道微生物(细菌总数、大肠杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和真菌)、纤维素酶活性、木聚糖酶活性、淀粉酶活性和蛋白酶活性与正常组存在显著差异(P0.01或P0.05)；各治疗组的脾虚便秘症状均有不同程度的改善,乳酸菌和双歧杆菌数均高于正常组(P0.01或P0.05),大肠杆菌数除铁皮石斛超微全量汤剂组极显著高于正常组外(P0.01),其余各治疗组均较低至正常组水平(P0.05)；铁皮石斛超微50%量汤剂组和四磨汤组真菌数均达到正常组水平(P0.05)；铁皮石斛超微全量汤剂组的纤维素酶活性及淀粉酶活性、超微50%量汤剂组纤维素酶活性、超微25%量汤剂组和四磨汤组蛋白酶活性均达到正常组水平(P0.05),各治疗组的木聚糖酶活性均极显著低于正常组(P0.01)。经铁皮石斛治疗后,血小板数量和比容显著高于正常组(P0.01或P0.05)；增加红细胞数量和比容；降低红细胞体积分布宽度；血红蛋白含量、白细胞和淋巴细胞数量均降低；红细胞平均血红蛋白含量和浓度均降低,但仍显著高于正常组(P0.01或P0.05)。超微50%汤剂组红细胞数量和比容显著高于模型组(P0.05),达到正常组水平(P0.05)；白细胞和淋巴细胞数量显著低于模型组和传统汤剂组(P0.01或P0.05),与正常组差异不显著(P0.05)。 超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道细菌多样性影响的研究结果显示,正常组和铁皮石斛超微50%量汤剂组、模型组和铁皮石斛传统汤剂组的OTUs、Shanon指数和Brillouin指数分别相同,且前两组均大于后两组；铁皮石斛超微50%量汤剂组与正常组群落结构的相似性系数最大,模型组和传统汤剂组较小；当聚类距离≥15且25时,各组小鼠肠道肠道菌群被聚为2类,正常组和铁皮石斛超微50%量汤剂组为1类,其余两组为1类；当聚类距离15时,各组小鼠肠道菌群被聚为4类,每组为一类；经主成分分析,正常组和铁皮石斛超微50%量汤剂治疗组对PC1的贡献率较大,模型组和铁皮石斛传统汤剂治疗组对PC2的贡献率相同。超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道乳酸杆菌多样性影响的研究结果显示,正常组、铁皮石斛传统汤剂组和超微50%量汤剂组的OTUs、Shanon指数和Brillouin指数相同,且均大于模型组；铁皮石斛超微50%量汤剂组与正常组乳酸杆菌群落结构的相似性系数最大,为0.3333,其次是模型组为0.1818,传统汤剂组最小,为0.1667；聚类分析和主成分分析结果显示,小鼠肠道乳酸杆菌多样性受脾虚便秘造模影响,发生改变,铁皮石斛两种汤剂通过不同的途径对其进行调控作用。 结论：小鼠脾虚便秘造模影响小鼠的体重,破坏了肠道微生物的平衡,并影响肠道酶活性；显著影响血小板数量及平均体积、白细胞数量,影响血液系统的功能。 铁皮石斛传统汤剂、超微全量汤剂、超微50%量汤剂和四磨汤对脾虚便秘均有疗效,通过不同的途径调控肠道微生态平衡,调整肠道酶活性,且铁皮石斛超微50%量汤剂、传统汤剂与四磨汤效果相当。经铁皮石斛治疗后,脾虚便秘小鼠的血小板数量及比容、红细胞数量及体积分布宽度、血红蛋白数量及红细胞平均血红蛋白含量和浓度、白细胞及淋巴细胞均有改善,超微50%量汤剂总体疗效优于传统汤剂。 脾虚便秘造模使小鼠肠道细菌和乳酸杆菌的多样性均遭到破坏,经铁皮石斛两种汤剂治疗,具有一定的调整作用,且超微50%量汤剂组小鼠肠道细菌和乳酸杆菌多样性更接近正常组,疗效更优。