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止痛健骨方治疗兔膝骨关节炎软骨的MRI评价及与NF-κB信号通路的相关性分析

苏新平  
【摘要】:目的:观察止痛健骨方治疗兔膝骨关节炎软骨的MRI评价以及对与N F-κ B信号通路的影响,并对两者进行相关性分析,探索MRI对KOA的诊断及软骨修复的价值,为临床运用止痛健骨方治疗膝骨关节炎提供实验依据。方法:90只白兔随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组,每组各18只,采用木瓜蛋白酶关节腔注射方法制备兔KOA模型后,模型验证成功后,止痛健骨低剂量组、高剂量组给与对应止痛健骨方灌胃,阳性药物组给与盐酸氨基葡萄糖片灌胃,正常对照组、模型对照组则灌服同剂量生理盐水。在实验干预前,干预第4周,第8周分别测量膝关节屈曲活动度测量和膝关节MRI检查,之后处死兔子,打开右膝关节腔,进行关节软骨及滑膜大体观察和光镜下显微形态观察,并免疫组织化学检测软骨MMP-1及TNF-α表达,RT-qPCR检测软骨IKKαmRNA及N F-κBmRNA表达,对MRI评价对与N F-κ B信号通路进行相关性分析。结果:①运用木瓜蛋白酶关节腔注射方法可成功制备兔KOA,制备的KOA动物模型病理改变同人类KOA类似。②实验干预前时,与正常对照组比较,模型对照组、阳性药物组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组在膝关节屈曲活动度、膝关节软骨MRI分级、关节软骨Mankin's评分、滑膜组织评分、软骨MMP-1及TNF-α表达、软骨IKKα mRNA及NF-κ BmRNA均有增加,差异有统计学意义(P0.05),模型对照组、阳性药物组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组四组比较,差异无统计学意义(P0.05)。③实验干预第4周时,与正常对照组比较,模型对照组、阳性药物组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组在膝关节屈曲活动度、关节软骨Mankin's评分、滑膜组织评分、软骨MMP-1及TNF-α表达、软骨IKKα mRNA及NF-κB mRNA均有增加,差异有统计学意义(P0.05),。与模型对照组比较,阳性药物组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组在膝关节软骨MRI分级差异无统计学意义(P0.05),但其余各指标均有改善差异有统计学意义(P0.05)。阳性药物组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组第4周时组间比较,差异无统计学意义(P0.05),但各指标较本组干预前得到改善(P0.05)。④实验干预第8周时,与正常对照组比较,模型对照组、阳性药物组、止痛健骨低剂量组在膝关节屈曲活动度、膝关节软骨MRI分级、关节软骨Mankin's评分、滑膜组织评分、软骨MMP-1及TNF-α表达、软骨IKK α mRNA及NF-κB mRNA均有增加,差异有统计学意义(P0.05),止痛健骨高剂量组膝关节屈曲活动度、膝关节软骨MRI分级、软骨IKK α mRNA及N F-κB mRNA表达恢复至正常水平(P>0.05)。与模型对照组比较,阳性药物组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组在以上各指标均得到明显改善(P0.05),较本组干预前比较,差异有统计学意义(P0.05)。止痛健骨高剂量组在膝关节屈曲活动度、软骨IKK α mRNA及N F-κBmRNA较阳性药物组、止痛健骨低剂量组得到明显改善(P<0.05)。对止痛健骨方治疗兔膝骨关节炎软骨的MRI评价以及与NF-κB信号通路的相关性分析发现,两者成呈直线正相关(P0.05)。结论:①运用木瓜蛋白酶关节腔注射可成功制备兔KOA模型,制备的KOA模型病理改变同人KOA相似,且该动物模型中NF-κB信号通路存在激活状态,MMP-1、TNF-α、IKK α mRNA及NF-κB mRNA的表达明显上升。②兔KOA模型中,NF-κB信号通路指标MMP-1.TNF-α、IKKα mRNA、N F-κBmRNA表达增加时,软骨MRI损伤分级和病理学评分上升,三者成正向直线相关。③盐酸氨基葡萄糖片对KOA具有治疗作用,作用机理可能通过抑制IKKαmRNA、 NF-κ B mRNA勺表达,减少下游产物MMP-1、TNF-α表达,达到抑制炎症反应和对软骨细胞的保护。④止痛健骨方对KOA模型有治疗作用,作用机理可能通过抑制KOA软骨N F-κ B信号通路,通过抑制IKK αmRNA、NF-κB mRNA的表达,减少下游产物MMP-1、TNF-α表达,达到抑制炎症反应和对软骨细胞的保护。⑤膝关节MRI可对KOA软骨损伤进行诊断和分级,并能无创、直观反映药物对KOA软骨的修复情况,与软骨病理学评分及NF-κB信号通路呈直线相关。


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