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GC-MS法寿胎丸干预RSA大鼠尿液代谢组学的研究

邹小花  
【摘要】:【目的】基于GC-MS方法,探讨寿胎丸干预复发性流产大鼠尿液代谢组学的研究,阐述寿胎丸安胎的具体作用机制。【方法】1.反复自然流产大鼠模型和正常妊娠模型的建立:S P F级S D大鼠,常规观察1周,将40只雌性大鼠分别与20只雄性大鼠按2:1合笼交配,检到阴栓者计为妊娠第0天,分别建立反复自然流产模型30只与正常妊娠模型10只。2.反复自然流产大鼠模型的分组与给药:将雌性孕鼠随机分为4组:寿胎丸组,黄体酮组,模型组,正常妊娠组。雌性大鼠于第二日凌晨阴道涂片,在显微镜下以阴道涂片出现大量精子结合发现阴栓脱落计为妊娠第0天,寿胎丸组、黄体酮组、模型组的孕鼠均于妊娠第1天至第10天予以羟基脲(450mg.Kg~(-1).d~(-1),生理盐水配置)灌胃,妊娠第10天予以米非司酮(3.75rag.Kg~(-1),生理盐水配置)灌胃,寿胎丸组从妊娠第1天起予中药汤剂寿胎丸(8ml.Kg~(-1).d~(-1))灌胃,连续10天;黄体酮组从妊娠第1天起,给予黄体酮(8mg.Kg~(-1).d~(-1))灌胃,直至妊娠第10天;模型组造模的同时给予等量生理盐水灌胃,连续10天,正常妊娠组从妊娠的第0天给予生理盐水灌胃(8 m l.K g~(-1).d~(-1)),直至妊娠第10天。治疗结束,收集大鼠尿液,收集尿液完毕后行腹主动脉取血,处死大鼠。将尿液样本置于-20摄氏度冰箱保存,对尿液微量样本进行批量预处理后,取1.0μL进样用于GC-MS分析。【结果】1.本实验确定了有效差异代谢物8 2种。2.寿胎丸组尿液代谢轮廓与模型组有明显的变化,甲基丁二酸(2-methyl-Butanedioic)、丝氨酸(Serine)、丙氨酸(Alanine)、葡糖二酸(Glucaric acid)、奎尼酸(Quinic acid)、焦谷氨酸(Pyroglutamic a c i d)、龙胆二糖(G e n t i b i o s e)、苏氨酸(T h r e o n i n e)、苯基丙氨酸(Phenylalanine)、异亮氨酸(Isoleucine)、尿(嘧啶核)苷(Uridine)、阿糖醇(Arabitol)、缬氨酸(Valine)、酪氨酸(Tyrosine)、核醣醇(Ribitol)、苏糖醇(Threitol)、柠苹酸(Citramalic acid)、泛酸(Pantothenic acid)在寿胎丸组的尿液中水平显著提高(P0.05),而尿嘧啶(Uracil)、2-酮戊二酸(2-Ketoglutaric acid)、尿酸(Uric acid)、乳酸(Lactic acid)、庚酸(Heptanoic acid)、3-羟基吡啶(3-Hydroxypyridine)、己二酸(Adipic a c i d)、琥珀酸(S u c c i n i c a c i d)、3磷酸甘油(G l y c e r i c a c i d-3-p h o s p h a t e)在寿胎丸组的尿液中水平显著下降(P0.05),这些代谢物的升高及降低是与寿胎丸治疗流产有一定的相关性。黄体酮组尿液代谢轮廓与模型组有明显的变化,苏氨酸(Threonine)、羟胺(Hydroxylamine)、焦谷氨酸(Pyroglutamic acid)、己糖酸(Hexonic acid)、Gentibiose在黄体酮组的尿液中水平显著提高(P0.05),而2-酮戊二酸(2-Ketoglutaric acid)、乳酸(Lactic acid)、甘油酸(Glyceric acid)、3-羟基吡啶(3-Hydroxypyridine)、尿酸(Uric acid、)尿嘧啶(Uracil)、乙醇酸(Glycolic acid)、庚酸(Heptanoic acid)、己二酸(Adipic acid)在黄体酮组的尿液中水平显著降低(P0.05),这两组比较出的差异代谢物是与黄体酮安胎相关的。正常妊娠组尿液代谢轮廓与模型组也存在明显的变化,3磷酸甘油(Glyceric acid-3-phosphate)、磷酸(Phosphoric acid)、甘油(Glycerol)在正常妊娠组的尿液中水平显著提高(P0.05),而丝氨酸(Serine)、半胱氨酸(Cysteine)等48种代谢物在正常妊娠组的尿液水平显著下降(P0.05),正常妊娠组与模型组的比较可以看出这是与流产相关的一些差异代谢物。【结论】1.模型组与寿胎丸组,模型组与黄体酮组以及模型组与正常妊娠组尿的确存在着代谢轮廓的显著差异。我们将在未来的临床工作中做进一步的研究。2.气相色谱技术揭示了模型组、寿胎丸组、黄体酮组、正常妊娠组尿液代谢轮廓的详细信息,从而说明了该种方法的可行性。同时主成分分析可以判定寿胎丸组尿液的代谢差异特征。此外,有82种代谢物被筛选出来。基于本次实验研究,我们相信,该方法在未来的治疗复发性流产将起到至关重要的作用。3.本实验说明了寿胎丸主要通过调体内苯丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、焦谷氨酸,影响儿茶酚胺、甲状腺素、谷氨酰胺的合成来起到安胎的功效。但寿胎丸治疗复发性流产的明确的作用机制需做深入研究。


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