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基于GC-MS法寿胎丸对RSA大鼠模型血浆代谢组学的研究

龚颖  
【摘要】:目的:研究寿胎丸对复发性流产大鼠的影响,用代谢组学来探究寿胎丸组及西药对照组大鼠血浆样本,找寻血浆代谢模型中的潜在生物标记物,从而探索寿胎丸的安胎作用机理,并进一步完善复发性流产的机制,从代谢组角度出发为寿胎丸治疗复发性流产提供药理实验依据。方法:1.动物实验造模部分,雌雄大鼠交配后的孕鼠,采用羟基脲加米非司酮灌胃的方法成功制造复发性流产大鼠的模型,并设定了寿胎丸治疗组、黄体酮西药治疗组及正常妊娠组,于第10天麻醉后腹主动脉取血,离心后获得血浆样本;2.GC-MS技术支持部分,样本收集后进行预处理,将预处理的样本进行GC-MS上机检测得到原始数据,再对原始数据进行总面积归一化处理,使用主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)进行无监督的数据分析,用偏最小二乘判别分析(Partial Least Squares-Discriminant Analysis,PLS-DA)进行有监督的数据分析,从整体上把握模型的准确性和组间的差异;3.最后用学生氏t-test和PLSDA第一主成分的变量重要性(VIP1)对差异变量进行筛选比较对照组和模型组得到差异性代谢产物;4.根据GC-MS总离子流图中各峰的保留时间挑选峰值,获取各峰与内标峰的峰面积数据,用相对峰面积(与内标峰的比值)表示代谢物的含量。各组模式识别采用主成分分析(PCA-DA)应用SIMCA2P1110软件。结果:1.成功制造复发性流产大鼠模型,流产大鼠不同情况的出现了阴道流血,毛发枯槁,精神萎靡,体重下降等情况;2.在实验中,共检测到了188个峰,根据已有数据库和标准品,其中共有83个物质获得了注释。这些物质主要集中于初级代谢产物,主要物质为有机酸(31%)及氨基酸(30%),另有糖醇(11%)、磷酸(7%)、脂肪酸(6%)、糖(6%)、胺类(3%)等;3.筛选出血浆中焦磷酸、丙胺酸、甘氨酸,分别是木糖醇、蛋氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、脯氨酸、己二酸、棕榈酸、十九烷酸、肉豆蔻酸、9,12-(Z,Z)-十八碳二烯酸、硬脂酸、9(Z)-十八碳烯酸、2,4-dihydroxybutanoic酸为复发性流产潜在的生物标记物。4.寿胎丸治疗复发性流产的大鼠血浆中发现了,苏糖酸、核糖酸、苏糖醇、β-丙氨酸、焦磷酸、葡糖酸、α-生育酚、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、2-氨基丁酸10种潜在生物标记物,取得较好的预测效果。结论:本研究推测根据四组大鼠血浆代谢图谱的变化,从血浆中筛选出的代谢物对协助诊断复发性流产,探究寿胎丸对于治疗复发性流产的作用机理有重大的指导意义。


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