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基于Treg/Th17细胞失衡探讨清温并用法对慢加亚急性肝衰竭肠源性内毒素血症大鼠肠黏膜炎症反应的调控

丁秀丽  
【摘要】:目的:通过观察清温并用法对慢加亚急性肝衰竭肠源性内毒素血症大鼠外周血内毒素、C反应蛋白、降钙素原、Treg/Th17细胞频数及其结肠组织相关的炎症因子、转录因子表达水平的影响,探讨其减轻内毒素血症从而达到抗肝衰竭的作用机制,为中医药治疗慢加亚急性肝衰竭提供免疫调控的新视角和临床依据。方法:采用牛血清白蛋白致敏建立免疫性肝纤维化大鼠模型,然后以腹腔注射D-Gal+ LPS液(合D-Gal 400mg/kg,LPS 100μg/kg)急性攻击建立肝衰竭IETM大鼠模型(同时正常组以等量生理盐水腹腔注射)。实验组分别予茵陈蒿汤、茵陈术附汤、温阳解毒化瘀方灌胃,阳性对照组予乳果糖灌胃,正常组与模型组予蒸馏水代替。检测各组大鼠急性攻击后1h、12h、24h内毒素、C反应蛋白、降钙素原、Treg/Th17细胞频数、结肠组织相关炎症因子(TNF-α、TGF-β、IL-10、IL-17A、IL-23)、FoxP3、ROR-γt相关蛋白、基因表达。结果:1、内毒素:与正常组比较,其余各组内毒素水平在各时间点均升高(P0.05),以模型组升高最明显(P0.01);与模型组比较,阳性对照组内毒素水平在各时间点下降(P0.05),其余各实验组内毒素水平均降低(P0.05),其中以清温并用法组降低最明显(与清法、温法组比较P0.05)。2、降钙素原、C反应蛋白:与正常组比较,其余各组PCT、CRP在各时间点均升高(P0.05),以模型组升高最明显(P0.01);与模型组比较,阳性对照组PCT、CRP在各时间点稍下降(P0.05),其余各实验组PCT、CRP水平均降低(P0.05),其中以清温并用法组降低最明显(与清法、温法组比较P0.05);清温并用法组PCT、CRP与前一时间点比较均有下降(P0.05),其余各组PCT、CRP与前一时间点比较均有上升(P0.05)。3、Treg、Th17细胞频数及比值:与正常组比较,其余各组Treg、Th17细胞频数在各时间点均升高(P0.05),模型组升高最明显(P0.01);与模型组比较,阳性对照Treg、Th17细胞在各时间点稍降低(P0.05),其余各实验组均降低(P0.05),其中以清温并用法组降低最明显(与清法、温法组比较P0.05)。与正常组比较,模型组Treg/Th17比值在各时间点均显著降低,细胞失衡向Th17方向偏移(P0.01);与模型组比较,清温并用法组Treg/Th17比值在各时间点均明显升高(P0.05),且随时间延长逐渐升高,细胞失衡向Treg方向纠正,阳性对照组、清法组、温法组与之比较无统计学意义(P0.05)。4、结肠组织IL-10、TNF-α及IL-17A、IL-23、TGF-β水平:与正常组比较,其余各组各炎症因子各时间点表达均升高(P0.05)(促炎因子升高幅度明显大于抑炎因子),模型组升高最明显(P0.01);与模型组比较,阳性对照组稍降低(P0.05),其余各实验组各炎症因子水平降低(P0.05),其中以清温并用法组降低最明显(与清法、温法组比较P0.05);清温并用法组对促炎因子抑制作用明显高于抑炎因子。5、RT-PCR体外扩增:与正常组比较,其余各组FoxP3mRNA、ROR-γt mRNA在各时间点均升高(P0.05),模型组升高最明显(P0.01);与模型组比较,阳性对照FoxP3mRNA、ROR-γ tmRNA在各时间点稍降低(P0.05),其余各实验组均降低(P0.05),其中以清温并用法组降低最明显(与清法、温法组比较P0.05);各实验组与前一时间点比较均有上升(P0.05);清温并用法组对ROR-γt mRNA降低的幅度高于FoxP3mRNA。6、结肠组织FoxP3、ROR-γt原位杂交与免疫组化:与正常组比较,其余各组FoxP3、ROR-γt相关蛋白及基因表达均有升高(P0.05)(ROR-γt相关蛋白及基因升高幅度大于FoxP3),模型组升高最明显(P0.01);与模型组比较,阳性对照组稍降低(P0.05),其余各实验组FoxP3、ROR-γt基因及蛋白表达均降低(P0.05),其中以清温并用法组降低最明显(与清法、温法组比较P0.05);清温并用法组对ROR-γt相关蛋白及基因降低的幅度高于FoxP3。结论:1.肝衰竭IETM发生时Treg/Th17细胞失衡,向Th17方向偏移,相关抑炎、促炎因子均释放增加,加剧肠源性内毒素血症程度。2.温阳解毒化瘀方能通过抑制肠源性内毒素血症时Foxp3、ROR-Yt表达而同时减少Treg、Th17细胞分化,进而减轻相关促炎与抑炎因子释放对机体产生的损伤,促进Treg/Th17细胞(抗炎/促炎作用)失衡向Treg方向恢复。


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