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血管生成性T淋巴细胞改善子痫前期大鼠胎盘灌注的研究

曹武占  
【摘要】:第一部分健康产妇血管生成性T淋巴细胞的提取与培养目的:探索人脐带血血管生成性T淋巴细胞的分离、培养的方法,为进一步研究研究血管生成性细胞改善子痫前期大鼠胎盘灌注奠定基础。方法:以无菌采血袋(枸橼酸钠配置),采集健康分娩孕妇胎盘脐带血,密度梯度离心分离脐带血单个核细胞,经MACS磁珠分选法、流式细胞分选法分离、鉴定CD3/CD31双阳性细胞(血管生成性T淋巴细胞)。以添加20%胎牛血清的M-199培养基培养细胞,添加VEGF促进其增殖。结果:通过MACS磁珠CD31阳性分选,,将所分选的CD31阳性细胞再经流式细胞分选仪,进行CD3阳性分选,得到CD3/CD31双阳性细胞即血管生成性T淋巴细胞有76.33%,培养后鉴定CD3/CD31双阳性细胞达81.3%。结论:采用密度梯度离心法分离健康分娩孕妇胎盘脐带血的单个核细胞,经MACS磁珠分选和流式细胞仪分选,通过观察培养细胞的生长及增殖,培养后再行流式细胞仪鉴定,所培养的细胞符合血管生成性T淋巴细胞的特征,证明该方法可以从健康产妇胎盘脐带血中分离取得血管生成性T淋巴细胞。第二部分血管生成性T淋巴细胞移植改善子痫前期模型大鼠胎盘灌注目的:了解血管生成性T淋巴细胞移植对改善子痫前期模型大鼠胎盘灌注的作用。方法:采用左旋亚硝酸精氨酸甲酯(L-NAME)腹腔注射建立子痫前期孕鼠模型,采用密度梯度离心法分离健康分娩孕妇脐带血单个核细胞,以MACS磁珠分选法和流式细胞分选法结合的方法,分离获取血管生成性T淋巴细胞,体外培养,制备细胞悬液,尾静脉注射移植于子痫前期孕鼠体内,用荧光显微镜观察胎盘新生血管情况,通过监测孕鼠血压和尿蛋白的变化,检测胎盘、子鼠重量及子鼠数量来了解妊娠结局,进一步了解血管生成性T淋巴细胞尾静脉移植对子痫前期大鼠胎盘血流灌注的改善作用。结果:荧光相差显微镜拍照半定量观察发现,尾静脉移植Tang细胞的研究组胎盘新生血管密度较对照组明显增加;血压及尿蛋白值较对照组也明显降低。结论:血管生成性T淋巴细胞尾静脉移植,可以一定程度的改善子痫前期模型孕鼠的胎盘灌注,可改善子痫前期孕鼠的临床症状。


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