敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ的结构与功能研究及两种蜘蛛毒素cDNA克隆
【摘要】：敬钊缨毛蛛(Chilobrachys jingzhao)产于我国海南省,其粗毒中含有多种多肽神经毒素,研究得比较深入的有敬钊缨毛蛛毒素-Ⅰ(jingzhaotoxin-Ⅰ,简称JZTX-Ⅰ),为一种抑制钙离子通道失活的通道毒素;敬钊缨毛蛛毒素-Ⅲ(jingzhaotoxin-Ⅲ,简称JZTX-Ⅲ),是一种电压门控钠通道抑制剂。
本文报道从敬钊缨毛蛛(Chilobrachys jingzhao)粗毒中,通过分子筛、阳离子交换色谱和反相高效液相色谱分离得到一种新的多肽神经毒素,命名为敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ(jingzhaotoxin-Ⅷ,JZTX-Ⅷ)。经MALDI-TOF分析表明该多肽分子量为4329.37Da,利用RACE的cDNA快速扩增法得到了敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ的全长cDNA,结合氨基酸自动测序仪测定和全长cDNA的推导得到了敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ的氨基酸序列,序列为NH_2-LFECSFSCDIKKNGKPCKGSGEKKCSGGWRCKMNFCVKV-COOH。此毒素分子由39个氨基酸残基组成,其中6个半胱氨酸。形成3对二硫键。敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ能阻断小鼠膈神经-膈肌标本的神经肌肉接头传递,并能阻断DRG神经元细胞上的钙通道。
本文还应用Race方法克隆了HWTX-Ⅹ和JZTX-Ⅷ的全长cDNA。根据毒素的氨基酸序列设计并合成了3’RACE和5’RACE的引物,通过叠合3’RACE和5’RACE扩增的序列就得到了毒素蛋白的cDNA全序列。两种毒素的cDNA都编码一个由21—24个氨基酸组成的信号肽区域,一个30—60个氨基酸残基组成的成熟蛋白区域和一个介于它们
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