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急性力竭运动大鼠腓肠肌的蛋白质与蛋白质组差异性表达的研究

张松江  
【摘要】:本研究的目的:研究运动大鼠腓肠肌蛋白质组的差异性表达特征,筛选出骨骼肌组织中对运动应激具有重要意义的差异性表达的蛋白质,探讨在蛋白质组学水平上运动性疲劳的发生机制。实验方法:10只雄性SD大鼠,按体重随机配对分为安静对照组(n=5)和运动实验组(n=5)。运动组依据Bedford所建立的大强度运动模型,运动至力竭。大鼠力竭后三小时和安静组同时做麻醉后断头处死,进行后肢腓肠肌蛋白质提取和含量测定。提取的蛋白质经过处理后进行两部分实验。第一章:急性力竭运动大鼠腓肠肌蛋白质差异性表达的初步研究。依次对蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、染色、蛋白胶内原位酶解、电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱分析;第二章:急性力竭运动大鼠腓肠肌的比较蛋白质组研究。依次对蛋白质进行固相pH梯度—SDS双向凝胶电泳、硝酸银染色、蛋白质胶内原位酶解、基质辅助激光解吸飞行时间串连质谱分析。第一部分实验结果:组织蛋白提取比较成功,Bradford蛋白定量大约40ug.ul~(-1)。电泳显示36个条带,与安静组比较,在运动组有的条带出现了明显增宽、密度增高,有的条带出现了明显变窄、密度降低。对具有明显变化的条带进行胶内原位酶解和质谱分析显示第三条带的运动组中出现了甲胎蛋白。第二部分实验结果:安静组和运动组蛋白质斑点数目分别为667±35个和572±28。共有282个差异表达的蛋白质点。运动后消失的蛋白质点有88个,运动后新增的蛋白质点32个,运动后表达量差异


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