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白术活性多糖的分离纯化及组成研究

谭敏  
【摘要】: 本课题以湖南平江产地白术干燥根茎为原料,对白术活性成分-多糖进行提取、分离、纯化、分子量的测定及组成研究。 通过方法学比较,首次确定白术活性多糖含量测定的最佳方法,试验表明采用苯酚-硫酸法测定白术多糖含量,操作简便,稳定可靠,适于基层单位使用,在此条件下测得白术水提浸膏中粗多糖(CAMP)含量为41.77%。通过对醇沉浓度、脱蛋白、脱色效果进行考察,优化白术多糖分离纯化方案。结果表明:采用85%乙醇沉淀,三氯乙酸(TCA)脱蛋白,活性炭脱色:温度60℃,时间15 min,活性炭加入量为1%,pH为4.5,纯化效果最佳,得白术精多糖(RAMP)。RAMP采用DEAE-52柱层析得RAMP-1 RAMP-2、RAMP-3,RAMP-1继以Sephadex G-100柱层析,得一单峰。本课题首次采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)检测白术多糖的重均分子量。采用T5、T10、T20、T40、T70不同分子量的标准葡聚糖系列,以保留时间为横坐标,重均分子量的对数值为纵坐标建立标准曲线,计算样品多糖的重均分子量(Mw)。试验结果表明Mw在5000~70000范围内线性关系良好,所得标准曲线回归方程为:lgMw=-0.303tR+3.4816,r=-0.9900,测得样品多糖重均分子量为32767。采用该法操作简便,方法重现性较好,准确性较高。 本课题对RAMP的组成进行研究,通过红外光谱(IR)、纸色谱(PC)、气相色谱(GC)分析、气-质联用色谱(GC-MS)、气相-声表面波传感器(FGC/SAW)确定白术精多糖RAMP的结构及其组成。IR显示RAMP具有典型的多糖吸收峰,GC、GC-MS及FGC/SAW检测得RAMP单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖,其摩尔比为1:0.74:1.88:1.07。FGC/SAW作为一种新型气相色谱,用于多糖组成的研究,其快速的检测速度预计在药物分析领域具有广阔的应用前 白术作为一种药食同源的植物,近年来,其活性成分多糖的增强免疫功能,抗氧化,降血糖等作用越来越受到医药行业的关注,它独特的功能,有望成为一种极具开发潜力和开发价值的保健品和药品。本文对湖南平江白术活性成分多糖进行研究,为平江白术的进一步开发提供实验依据,也为充分利用和发展湖南平江的天然植物资源具有重要的科学意义。


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