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胞质M-CSF对MCF-7细胞多药耐药相关miRNA表达与凋亡的影响

朱沈群  
【摘要】:目的:探讨胞质M-CSF对人乳腺癌MCF-7细胞多药耐药miRNA的表达与凋亡的影响。 方法:常规培养母代人乳腺癌细胞MCF-7(命名为MCF-7细胞)、转染胞质定位空载体pCMV/cyto/myc的MCF-7细胞(命名为MCF-7-C细胞)、稳定转染M-CSF—pCMV/cyto/myc-M-CSF的MCF-7细胞(命名为MCF-7-M细胞)。用MTT检测胞质M-CSF对MCF-7细胞药物敏感性的影响,用HPLC法测定三种MCF-7细胞内抗肿瘤药TAX、5-FU浓度。用miRNA芯片筛选差异表达的miRNA,并用定量Real time PCR验证miRNA芯片结果;通过生物信息学软件预测差异表达的miRNA可能调控的靶基因,用Western blot验证其可能的靶基因;利用Hoechst-PI染色法和流式细胞术观察胞质M-CSF对MCF-7细胞凋亡的影响。 结果: MTT结果显示MCF-7-M细胞对TAX和5-FU的敏感性明显低于MCF-7细胞和MCF-7-C细胞(p0.05),MCF-7-C细胞、MCF-7细胞和MCF-7-M细胞对TAX的IC50值分别为10.37、9.58、77.35,对5-FU的IC50值分别为21.57、20.13、207.31。高效液相色谱法结果显示MCF-7-M细胞内几乎检测不到TAX和5-FU,MCF-7-M细胞内的浓度均明显低于MCF-7-C和MCF-7细胞(p0.05)。基因芯片结果显示,16个miRNA在MCF-7-M细胞中差异表达,在MCF-7-M细胞中表达升高(>1.5倍)的miRNAs有hsa-miRPlus-F1159、hsa-miRPlus-E1045、hsa-miR-665、hsa-miR-939、hsa-miR-1280、hsa-miR-27a、hsa-miR-1274a、hsa-let-7e、hsa-miR-34c-5p、hsa-miR-720,表达降低(<0.5倍)的miRNAs有hsa-miR-25*、hsa-miR-1290、hsa-miR-34b、hsa-miR-143、hsa-miR-1184、hsa-miRPlus-F1042,其中hsa-miRPlus-F1159、hsa-miRPlus-E1045和hsa-miRPlus-F1042是计算机软件预测的差异表达的miRNA基因。Real time PCR验证了has-miR-27a、has-let-7e、has-miR-143在MCF-7-M细胞中表达均上调。Western blot结果显示MCF-7-M细胞中ABL2蛋白的表达水平明显高于MCF-7-C细胞和MCF-7细胞(p0.05),MCF-7-C细胞和MCF-7细胞的表达水平无明显差异(p0.05)。Hoechst染色结果表明MCF-7-C和MCF-7细胞出现明显的凋亡形态特征,而MCF-7-M细胞的凋亡效应不明显。流式细胞术结果显示:用2.0μg/mL的TAX处理细胞24h,MCF-7-C细胞、MCF-7细胞和MCF-7-M的凋亡率分别为40.2%、51.4%和12.6%;用13.5μg/mL的5-FU处理细胞24h, MCF-7-C细胞、MCF-7细胞和MCF-7-M的凋亡率分别为44.9%、42.1%、0,提示:MCF-7-M细胞的凋亡率明显低于MCF-7细胞和MCF-7-C细胞(p0.05)。 结论:1.胞质M-CSF可提高MCF-7细胞的活性,下调MCF-7细胞对药物的敏感性。 2.胞质M-CSF能上调细胞多药耐药相关的has-miR-27a、has-let-7e、has-miR-143的表达。 3.胞质M-CSF诱导ABL2抗凋亡蛋白的表达,增强MCF-7细胞的抗凋亡能力。


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