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COX-2shRNA对实验性大鼠肝纤维化的影响

罗雯  
【摘要】:目的 初步研究COX-2shRNA对CCL4复合因素诱导的大鼠肝纤维化的防治作用及其作用机制。 方法 (1)实验性大鼠肝纤维化模型的建立:50只清洁级SD大鼠正常喂养1周后,随机分为5组:正常组、模型组、COX-2shRNA治疗组、空载体组、尼美舒利组,每组10只。除正常组外,其它各组均以CCl4溶液(40%CCl4花生油,2ml/kg次5d)灌胃,同时予以高脂饮食(普通饲料基础上加2%胆固醇、10%猪油)喂养。并于造模1周后,COX-2shRNA治疗组予以尾静脉注射100ulCOX-2shRNA,空载体组予以尾静脉注射100ul空载体,其余3组均予等量生理盐水尾静脉注射,1次/d;同时尼美舒利组予以尼美舒利6mg/kg灌胃,其余4组均予等量0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,1次/d;正常组予以普通饲料喂养。 (2)各组大鼠检测指标的观察:观察各组大鼠一般情况,于干预12周后称量体重,处死大鼠后取血及肝组织,观察肝脏大体外观,并计算肝指数(肝湿重/体重x100%),并检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平;各组肝组织行苏丹IV染色、HE染色和Masson胶原染色观察大鼠肝脏组织病理学的改变;采用RT-PCR法检测大鼠肝脏COX-2、α-SMA、CCL2、P53、CXCL10mRNA的表达情况。 结果 (1)COX-2shRNA对大鼠体重、肝指数的影响:造模结束时各组大鼠的体重均有所增加。与正常组比较,模型组和空载体组大鼠体重增长缓慢,但模型组、空载体组和尼美舒利组肝指数显著升高,均有显著性差异(P0.01);COX-2shRNA治疗组和尼美舒利组大鼠体重增长较模型组和空载体组快,肝指数低于模型组和空载体组,尤以COX-2shRNA治疗组效果更佳(P0.01,0.05);空载体组与模型组之间体重和肝指数无统计学意义(P0.05)。 (2)COX-2shRNA对大鼠血清学指标的影响:与正常组比较,模型组、COX-2shRNA治疗组、空载体组及尼美舒利组大鼠血清中ALT、AST、TC、TG水平均明显升高(P0.01);除尼美舒利组和空载体组的TG水平无差异性(P0.05)外,尼美舒利组其余指标和COX-2shRNA治疗组的各项指标均低于模型组和空载体,其中以COX-2shRNA治疗组下降更明显(P0.01,P0.05);模型组和空载体组各血清学指标无统计学意义(P0.05)。 (3)COX-2shRNA对大鼠病理学的影响:据苏丹IV染色、HE染色及Masson胶原染色所示,模型组、COX-2shRNA治疗组、空载体组、尼美舒利组大鼠病理学评分及胶原面积分析均明显升高于正常组(P0.01);COX-2shRNA治疗组及尼美舒利组病理学评分及胶原面积分析低于模型组和空载体组,且以COX-2shRNA治疗组效果更明显(P0.01,P0.05);空载体组与模型组病理学评分及胶原面积分析无统计学意义(P0.05)。 (4)COX-2shRNA对大鼠各基因mRNA表达的影响:模型组、COX-2shRNA治疗组、空载体组和尼美舒利组大鼠肝脏组织中COX-2、α-SMA、CCL2、P53、CXCL10mRNA表达水平较正常组均明显升高(P0.01);COX-2shRNA治疗组和尼美舒利组各个基因mRNA表达水平较模型组和空载体组均下调,以COX-2shRNA治疗组下调更明显(P0.01);模型组与空载体组比较无统计学意义(P0.05)。 结论 1、COX-2shRNA可降低肝纤维化大鼠血脂,改善其肝功能及肝脏病理学变化,具有肝纤维化保护作用。 2、COX-2shRNA对实验性肝纤维化的保护作用可能与下调肝组织COX-2、α-SMA、P53、CCL2和CXCL10mRNA的表达有关。 3、COX-2shRNA对肝纤维化保护作用较尼美舒利有更明显的效果。


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