收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

PLK1基因沉默抑制淋巴瘤Raji细胞增殖和侵袭

钟雅婷  
【摘要】:[目的]Polo样激酶1(polo-like kinase 1,PLK1)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,在调节细胞周期、维持基因组稳定和修复DNA损伤中起重要作用。研究表明PLK1在人类多数肿瘤中高表达,我们前期实验也发现EBV转化淋巴母细胞中PLK1表达上调。本实验通过体外细胞实验及动物实验,观察RNA干扰PLK1表达对淋巴瘤Raji细胞增殖、迁移侵袭、细胞周期和凋亡以及裸鼠移植瘤形成等生物学行为的影响,研究PLK1在EBV相关淋巴瘤发生中的作用,为淋巴瘤的分子机制研究与靶向治疗提供实验依据。[方法]构建针对PLK1基因的慢病毒干扰载体p Len R-GPHh PLK1-sh,建立PLK1稳定低表达的Raji细胞系,倒置荧光显微镜观察细胞内绿色荧光情况,经过q RT-PCR及Western Blot技术验证PLK1干扰效果。采用CCK-8、流式细胞术、迁移侵袭实验及裸鼠成瘤实验,观察PLK1表达改变前后淋巴瘤Raji细胞生物学行为的变化。[结果]1.成功建立PLK1稳定低表达的Raji细胞系。重组质粒酶切电泳结果与预期相符,质粒测序结果经BLAST比对显示,目的基因的干扰质粒p Len R-GPH-h PLK1-sh与设计的干扰序列吻合率达100%,证明载体构建成功;荧光显微镜观察显示转染组携带绿色荧光的细胞数达80%;q RT-PCR、Western Blot检测表明转染p Len R-GPH-h PLK1-sh质粒的细胞(干扰组,Raji/PLK1 sh RNA)较转染p Len R-GPH的细胞(空载体组,Raji/GPH)和普通Raji细胞(空白组)相比,PLK1基因的m RNA表达及蛋白水平均明显降低,表明成功建立PLK1稳定低表达的Raji细胞系。且干扰组PLK1-SH1中PLK1 m RNA水平下降更为明显,提示干扰效果最好,所以选取PLK1-SH1组进入后续实验。2.干扰PLK1表达可抑制淋巴瘤Raji细胞的增殖、迁移侵袭能力,诱导G2期阻滞和凋亡,并抑制裸鼠移植瘤的形成。CCK-8结果显示:干扰组较空载体组及空白组相比,生长速度慢,且差异具有统计学意义(P0.01),表明干扰PLK1表达可抑制Raji细胞的增殖。迁移侵袭实验结果显示:干扰组较空载体组及空白组相比,迁移细胞数较少,差异有统计学意义(P0.05);干扰组穿过Matrigel基质胶的细胞数明显少于空载体组及空白组,差异有统计学意义(P0.01),表明干扰PLK1的表达可抑制淋巴瘤Raji细胞的迁移和侵袭能力。流式细胞术结果显示:干扰组较空载体组及空白组相比,G2期细胞百分比显著升高,G1期细胞百分比降低(P0.01);细胞早期凋亡率明显升高(P0.01),差异有统计学意义。表明干扰PLK1表达可诱导淋巴瘤Raji细胞G2期阻滞和凋亡。裸鼠成瘤实验结果显示:空载体组及空白组各组成瘤率达80%;而干扰组成瘤率为0%。干扰组相比于对照组,裸鼠成瘤率明显下降,这提示干扰PLK1的表达,对裸鼠移植瘤的形成有显著抑制作用。[结论]干扰PLK1的表达可抑制淋巴瘤Raji细胞增殖、迁移侵袭及移植瘤形成,诱导凋亡与周期阻滞。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 雷鸣,张英豪,蔺涛;原发性脾型淋巴瘤的诊断和治疗(附3例报告)[J];肝胆外科杂志;2001年02期
2 ;血管内大B细胞淋巴瘤[J];临床与实验病理学杂志;2002年01期
3 陆志成,周道银;小儿胸水查见恶性淋巴瘤细胞二例[J];江西医学检验;2004年02期
4 林竞韧;肖扬;;以三系减少表现为主的淋巴瘤1例[J];广东医学;2006年08期
5 李亚琴;张俊;司晓枫;庞洁;;血管内皮生长因子与淋巴瘤的相关性研究[J];甘肃医药;2008年04期
6 郭智;谭晓华;陈丰;石宇杰;张明;张育葵;胡碧川;纪妍;瞿嵘;;细胞因子诱导的杀伤细胞治疗难治性淋巴瘤的临床研究[J];中华实用诊断与治疗杂志;2009年10期
7 Kawamoto K;Nakamura S;Iwashita A;刘勇;;原发性胃T细胞淋巴瘤的临床病理特征[J];临床与实验病理学杂志;2011年01期
8 孙静;姚烨;陈琳军;邓晓辉;郝思国;;淋巴瘤细胞胞外体生物学特性及其抗淋巴瘤效应的研究[J];实用医学杂志;2012年14期
9 夏乐敏;陈秋生;张莉;;小肠黏膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤1例报告[J];现代肿瘤医学;2012年12期
10 唐华阳;;双克隆B-细胞淋巴瘤[J];国外医学.输血及血液学分册;1986年01期
11 郑锦阳,欧阳永娥,何逸丽;10例儿童、青少年外周T细胞淋巴瘤临床病理分析[J];当代医师杂志;1997年02期
12 ;什么是肝脾γδT细胞淋巴瘤?[J];诊断病理学杂志;1997年02期
13 纪小龙,王淑琴;胃外淋巴瘤抗Hp治疗也能消退[J];华人消化杂志;1998年04期
14 朱梅刚;边缘区B细胞淋巴瘤[J];诊断病理学杂志;1999年04期
15 何蓉会;刘林;;γδT细胞淋巴瘤/白血病1例[J];第三军医大学学报;2014年04期
16 陈彦凡,陈少贤,潘优津;以多发性浆膜腔积液为首发症状的淋巴瘤1例[J];浙江医学;2000年12期
17 雷鸣,张英豪,蔺涛;原发性脾型淋巴瘤3例报告[J];中国实用外科杂志;2001年08期
18 杨晓凤;病毒感染与淋巴瘤[J];中国实用内科杂志;2002年03期
19 蒋莉莉,刘卫平,廖殿英,李甘地,鲁昌立;肝脾γδT细胞淋巴瘤一例[J];中华病理学杂志;2002年03期
20 皋岚湘,丁华野,严庆汉;肝脾γδT细胞淋巴瘤[J];中华病理学杂志;2002年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 邹萍;;疑难危重淋巴瘤诊治的思考[A];2009年浙江省血液病学学术年会论文集[C];2009年
2 沈志祥;周励;;复发难治性淋巴瘤的治疗进展[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
3 朱平;;淋巴瘤的分子诊断学方法评价[A];第七届全国血液免疫学学术大会暨2008年浙江省血液病学术年会论文汇编[C];2008年
4 周晓曦;;跨膜型TNF-α在淋巴瘤中的表达及其抗体的靶向治疗[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
5 王华庆;钱正子;张会来;;外周T细胞淋巴瘤的诊治新策略[A];第十一届中国抗癌协会全国淋巴瘤学术大会教育论文集[C];2009年
6 陈兵;欧阳建;邵晓雁;周敏;;肝脾T细胞淋巴瘤中枢神经系统浸润1例[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
7 颜次慧;杨铭;李双静;熊冬生;;抗CD20 ScFv-TRAIL融合蛋白的构建表达及其对BJAB淋巴瘤细胞生长的抑制作用[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
8 唐建发;;外周T细胞淋巴瘤合并黑热病形态学特点观察[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年
9 周郁鸿;;惰性淋巴瘤的治疗进展[A];2006年浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2006年
10 张巧花;侯淑玲;;难治性弥漫大B细胞淋巴瘤研究进展[A];第一届全国难治性淋巴瘤学术研讨会暨第二届全国多发性骨髓瘤学术研讨会(国家级血液系统恶性肿瘤继续医学教育学习班)继续教育集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李华飞;抗CD20纳米抗体梳的构建及其抗淋巴瘤作用研究[D];第二军医大学;2015年
2 宋国齐;microRNA-224在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其功能研究[D];东南大学;2015年
3 张杨;EB病毒诱发淋巴瘤基因表达谱及miRNA表达谱的分析研究[D];南华大学;2016年
4 王孜;外周T细胞淋巴瘤中转录因子GATA3的预后分析和体外研究[D];北京协和医学院;2015年
5 王昊天;雷利度胺对肿瘤相关巨噬细胞的作用及其对淋巴瘤生长的影响[D];北京协和医学院;2012年
6 唐友红;高效靶向调控突变型Bik基因促淋巴瘤细胞凋亡研究[D];中南大学;2010年
7 冯晓莉;中国人群外周T和NK细胞淋巴瘤临床、病理和分子生物学特点[D];北京协和医学院;2013年
8 代兴斌;天花粉蛋白抗小鼠B细胞淋巴瘤的作用及机制研究[D];南京中医药大学;2015年
9 俞泽阳;重组人p53腺病毒注射液联合放射治疗对人淋巴瘤疗效的实验研究[D];苏州大学;2008年
10 姜志超;肿瘤相关巨噬细胞(TAM)与淋巴瘤细胞相互作用的研究[D];北京协和医学院;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵志伟;鼻腔NK/T细胞淋巴瘤的临床分析[D];福建医科大学;2015年
2 殷少宁;MicroRNA-21与NK/T细胞淋巴瘤生长调控及临床特征的关系[D];河北医科大学;2015年
3 王太昊;HBV感染与淋巴瘤p53、Bcl-2表达、病理类型及临床特征的相关性研究[D];河北医科大学;2015年
4 乔立娇;179例弥漫大B细胞淋巴瘤临床病理特征及预后分析[D];宁夏医科大学;2015年
5 宋秋娟;弥漫大B细胞淋巴瘤中miR-29b的表达及功能研究[D];郑州大学;2015年
6 苏红;MicroRNA-320d通过调控靶基因CDK6抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖[D];山西医科大学;2015年
7 李娟;胞膜表面CD20蛋白表达下降的弥漫大B细胞淋巴瘤的临床病理特征分析[D];复旦大学;2014年
8 张以若;胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤临床特征、CD10,Bcl-6和VEGF表达与预后的相关性研究[D];安徽医科大学;2015年
9 徐玉莲;IRF8对弥漫性大B细胞淋巴瘤的生长调控研究[D];宁波大学;2015年
10 唐文静;~(18)F-FDG PET/CT在鼻型NK/T细胞淋巴瘤分期及治疗后随访中的应用[D];安徽医科大学;2015年
中国重要报纸全文数据库 前9条
1 安阳地区医院副院长、主任医师 李新刚;从罗京去世谈淋巴瘤的防治[N];安阳日报;2009年
2 王彦艳 上海交通大学医学院附属瑞金医院血液科 上海血液学研究所医生;以科学态度面对淋巴瘤[N];文汇报;2013年
3 杨霞 宁习源;我国利用分子靶向技术治疗难治性淋巴瘤获突破[N];中国中医药报;2003年
4 钱岩;35年来首个治疗两种类型淋巴瘤的药物问世[N];中国医药报;2011年
5 顾蓓红;淋巴瘤遇到劲敌[N];光明日报;2000年
6 ;淋巴瘤该不该放、化疗?[N];健康时报;2006年
7 时仲省;高思敏;运用PCR技术“搜索”恶性淋巴瘤细胞[N];中国医药报;2002年
8 杨淑娟;美研究出对肿瘤细胞具高亲和性肽[N];中国医药报;2006年
9 刘向;德国先灵公司研制出治疗B细胞淋巴瘤新药[N];经济参考报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978