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双去甲氧基姜黄素激活JAK2/STAT3通路改善鱼藤酮对SH-SY5Y细胞的毒性作用

何端群  
【摘要】:【目的】本研究旨在探讨双去甲氧基姜黄素改善鱼藤酮对SH-SY5Y细胞毒性作用的机制,进一步明确双去甲氧基姜黄素是否通过激活JAK2/STAT3通路改善鱼藤酮对SH-SY5Y细胞毒性作用。【方法】1.通过鱼藤酮损伤的SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型。MTT法检测SH-SY5Y细胞活力筛选鱼藤酮最佳造模浓度。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)活性检测观察鱼藤酮对SH-SY5Y细胞氧化应激的影响。2.探讨BDMC对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞的保护作用。MTT法检测SH-SY5Y细胞活力筛选BDMC最佳治疗浓度及观察其保护作用。SOD、GSH活性检测观察BDMC对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞内氧化应激的改善作用。3.探讨BDMC对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞内JAK2/STAT3通路的影响。蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测p-JAK2及p-STAT3的表达,观察BDMC对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞内JAK2/STAT3通路的激活情况。4.探讨JAK2/STAT3通路抑制剂AG490对BDMC在鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞中保护作用的影响。蛋白免疫印迹法检测p-JAK2及p-STAT3的表达观察AG490对JAK2/STAT3通路的抑制效果。MTT法检测细胞活力观察AG490对BDMC改善鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞活力的影响。SOD、GSH活性检测观察AG490对BDMC改善鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞抗氧化应激作用的影响。5.探讨STAT3抑制剂S3I-201对BDMC在鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞中保护作用的影响。蛋白免疫印迹法检测p-STAT3的表达观察S3I-201对STAT3负性表达的效果。MTT法检测细胞活力观察S3I-201对BDMC改善鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞活力的影响。SOD、GSH活性检测观察S3I-201对BDMC改善鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞抗氧化应激作用的影响。【结果】1.100 nmol/L的鱼藤酮可对SH-SY5Y细胞产生毒性作用,用于建立PD的细胞模型。2.BDMC可改善细胞活力及抗氧化应激能力,从而对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞起保护作用。3.BDMC可激活鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞内JAK2/STAT3通路,上调p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达。4.JAK2/STAT3通路抑制剂AG490可逆转BDMC对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞活力的改善及抗氧化应激作用。5.STAT3抑制剂S3I-201可拮抗BDMC对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞活力的改善及抗氧化应激作用。【结论】双去甲氧姜黄素激活JAK2/STAT3通路改善鱼藤酮对SH-SY5Y细胞的毒性作用。


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