收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

hNIS转染鼻咽癌介导放射性核素显像和治疗的实验研究

钟兴  
【摘要】:目的: 本文通过建立基于人甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因转染介导放射性核素显像和治疗鼻咽癌的技术,为鼻咽癌进行放射性核素报告基因显像和基因治疗提供一种新的治疗策略;通过建立动物模型,运用扩散加权磁共振成像(DW-MRI)早期评价131I对hNIS转染鼻咽癌移植瘤的治疗效果,为靶向放射性核素治疗的疗效监测提供新的方法;以调控肿瘤凋亡的相关基因为靶点,探讨hNIS转染介导放射性核素治疗鼻咽癌的作用机制。 方法: 1、体外部分:构建重组表达质粒pCMV-Tag2-hNIS,通过脂质体法转染鼻咽癌细胞株CNE-2,G418筛选得到稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞株CNE-2-hNIS;研究其摄取125I活性以及125I内流和外流特征;通过CCK-8细胞增殖实验、克隆形成实验、Hoechst 33342荧光染色法和AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞技术检测131I对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。 2、体内部分:建立裸鼠鼻咽癌移植瘤模型。当移植瘤直径达10 mm时,裸鼠腹膜内注射125I,用Y-计数器测定注射后0.5、1、2、6、24小时不同脏器的cpm计数,进行裸鼠体内脏器125I分布定量实验;裸鼠腹腔内注射99mTcO4,进行鼻咽癌荷瘤裸鼠99mTc显像。 3、运用磁共振成像(MRI)观察131I治疗后实验组和对照组移植瘤在3、6、12、18、24天的体积变化情况;通过DW-MRI观察131I治疗后3、6、12、18、24天移植瘤ADC值的变化,并与治疗后6、12、18、24天TUNEL法和Caspase-3免疫组化法检测细胞凋亡,Ki-67免疫组化法检测细胞增殖情况进行相关性分析。 4、通过Western blot检测131I作用前后鼻咽癌细胞内p53、Bax、Bcl-2、Caspase-3和Survivin的蛋白表达水平的变化。 结果: 1、成功构建重组表达质粒pCMV-Tag2-hNIS,得到稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞株CNE-2-hNIS。CNE-2-hNIS摄取125I活性较CNE-2增高17.1±2.3倍(P0.05),125I在CNE-2-hNIS中快速聚集,30分钟达到高峰,同时125I从细胞中亦快速外流,有效半衰期约为8.45分钟。随着131I浓度的增高,CNE-2-hNIS增殖率和克隆形成率逐渐降低,凋亡率逐渐增高。 2、成功构建裸鼠鼻咽癌移植瘤模型,体内脏器125I分布定量实验显示,hNIS转染移植瘤摄取125I能力增强,1小时达到高峰,2小时仍维持较高的水平,125I生物半衰期约1.56小时。99mTc显像实验显示,hNIS转染移植瘤有放射性浓聚,肿瘤显影清晰,而对照组移植瘤未见显影。 3、通过MRI观察,131I治疗后实验组移植瘤体积较对照组明显缩小(P0.05)。DW-MRI显示,131I治疗后第3天,实验组ADC值有增高,第6天和12天达到高峰,随后ADC值下降,治疗后移植瘤ADC值与TUNEL法检测细胞凋亡率呈正相关(r=0.72,P0.05),与Caspase-3阳性率呈正相关(r=0.65,P0.05),与Ki-67标记指数呈负相关(r=-0.71,P0.05)。 4、131I作用于hNIS转染的鼻咽癌细胞,上调p53表达,下调Bcl-2表达,Caspase-3活化增加,Survivin蛋白高表达,对Bax的表达无影响。 结论: 成功建立基于hNIS基因转染介导放射性核素显像和治疗鼻咽癌的基因治疗方法。首次运用DW-MRI成像技术实现从水分子微观变化水平对靶向放射性核素治疗肿瘤疗效的早期无创性监测,展示了DW-MRI在基因治疗疗效监测上的应用前景。131I能有效抑制hNIS转染鼻咽癌的生长,其凋亡作用机制与上调p53表达,下调Bcl-2表达,促进Caspase-3活化有关。


知网文化
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 钟兴;徐浩;弓健;郭斌;;hNIS转染介导放射性核素显像和治疗鼻咽癌及其机制研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
2 郭睿;徐昊平;李彪;;~(131)I辐射正反馈调控杆状病毒介导hNIS基因在脑胶质瘤治疗中的实验研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
3 钟兴;徐浩;弓健;郭斌;;扩散加权磁共振成像早期评价hNIS转染鼻咽癌移植瘤~(131)I治疗效果的研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
4 石怡珍;汤亚莉;刘增礼;;hNIS基因转染介导宫颈癌细胞放射性碘摄取的体内外实验研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
5 李多兰;张伟杰;钱鹏旭;曹卫;;hNIS表达载体构建及在乳腺癌细胞中功能研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
6 赵祯;黄蕤;匡安仁;;Survivin启动子调控hNIS基因介导肿瘤核素显像和治疗的基础研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
7 李玮;谭建;董伟伟;;hTERT启动子引导hNIS基因重组腺病毒介导放射性核素的裸鼠显像[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
8 杨卫东;赵荣;秦炜炜;锁耀宇;汪静;;hNIS介导测量microRNA let-7在肺腺癌A549细胞的表达[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
9 李玮;谭建;王澎;;hTERT启动子引导下共转染hNIS基因和hTPO基因介导放射性碘治疗靶向性治疗胶质瘤实验研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 钟兴;hNIS转染鼻咽癌介导放射性核素显像和治疗的实验研究[D];暨南大学;2010年
2 李玮;GFAP及hTERT双启动子靶向性表达hNIS基因引导放射性碘治疗胶质瘤[D];天津医科大学;2013年
3 王澎;hTERT启动子调控hNIS和hTPO基因联合转染胶质瘤细胞介导放射性碘治疗的研究[D];天津医科大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 汤亚莉;hNIS基因转染介导宫颈癌放射性核素显像和治疗的实验研究[D];苏州大学;2010年
2 胡群超;含hNIS报告基因的乏氧调控重组质粒构建及其在人肺腺癌细胞株微环境乏氧检测中应用的实验研究[D];苏州大学;2012年
3 许袁琦;Egr-1启动子调控的hNIS基因转染介导宫颈癌放射性核素显像和治疗研究[D];苏州大学;2012年
4 董伟伟;hTERT启动子调控hNIS基因转染胶质瘤细胞介导放射性碘治疗的动物水平研究[D];天津医科大学;2012年
5 李多兰;hNIS表达载体构建及其在乳腺癌细胞中功能的初步研究[D];华中科技大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978