收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

枯草芽孢杆菌ATCC 9372 Mn-SOD的克隆、表达与特性研究

赵怡  
【摘要】:为了实现SOD基因在大肠杆菌(E. coli)中的可溶性表达,根据枯草芽孢杆菌168(Bacillus subtilis 168)的sodA核酸序列设计引物,以枯草芽孢杆菌ATCC 9372的基因组DNA为模板,PCR扩增获得了SOD基因。分析表明此SOD基因编码的氨基酸序列与Bacillus属的纳豆枯草芽孢杆菌BEST 195(Bacillus subtilis natto BEST 195)和枯草芽抱杆菌168(Bacillus subtilis 168)的Mn-SOD序列具有较高的同源性。将此基因重组至原核表达载体pET28a,构建含SOD基因的重组表达质粒pET28a-SOD,并转化至大肠杆菌BL21 (DE3). IPTG诱导表达获得SOD融合蛋白,蛋白分子量约为26 kD,目的蛋白可溶性表达量高达45.6%。SOD融合蛋白纯化后,NBT活性负染色确定其为Mn-SOD.改良的连苯三酚自氧化法测定SOD活力,其比活高达2553.211 U/mg.Mn-SOD融合蛋白在pH 6.0-11.0范围内较为稳定,在pH 8.0左右具有最高酶活力。50℃处理90 min后,残余酶活仍有75%以上。利用荧光光谱分析法系统地研究了在不同pH、不同浓度变性剂盐酸胍或尿素存在时Mn-SOD融合蛋白构象的变化,并与酶活数据进行了对比。结果表明,酶活力的变化与荧光光谱所表现出来的蛋白质构象的变化几乎一致。为了证明Glu167对维持蛋白质空间结构有重要的作用,利用定点突变技术改变Glu167的密码子,制备突变体SOD [E167A]融合蛋白。与SOD融合蛋白相比,SOD [E167A]融合蛋白在335 nm处的荧光强度明显增大且荧光光谱发射波长发生了红移,说明SOD [E167A]融合蛋白的空间结构已经发生变化。SOD [E167A]融合蛋白的酶活仅有74.989 U/mg,为非突变体的2.94%,其热稳定性和抵抗盐酸胍的能力都明显降低,说明Glu167对酶活及维持蛋白空间结构稳定性具有重要的贡献。枯草芽孢杆菌ATCC 9372 Mn-SOD的制备与特性研究为阐明其结构与功能以及进一步探索Mn-SOD的简便高效的生产方法奠定了基础,具有重要的理论和现实意义。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张咏春;郝思捷;邹寅;赵国屏;丁晓明;;甜味蛋白Brazzein在Escherichia coli和Bacillus subtilis中的表达研究[J];复旦学报(自然科学版);2009年01期
2 孔建;王文夕;赵白鸽;程红梅;申效诚;张桂芬;;枯草芽孢杆菌B-903菌株抗菌物质的研究[J];微生物学报;1992年06期
3 陈中义,张杰,曹景萍,丁之铨,黄大昉 ,陈志谊;杀虫防病基因工程枯草芽孢杆菌的构建[J];生物工程学报;1999年02期
4 张蓓,王健,陈宁,张克旭,浅井博,方杰;枯草芽孢杆菌生产鸟苷的途径分析(英文)[J];南开大学学报(自然科学版);2005年01期
5 彭其安;张西峰;吴思方;王伟平;;同源重组法构建枯草芽孢杆菌转酮酶缺失突变菌株[J];生物技术;2006年06期
6 李忠玲;张强;马齐;岳淑宁;张红艳;胡云红;秦涛;;产蛋白酶枯草芽孢杆菌的复壮及生产初步研究[J];中国酿造;2009年04期
7 彭福中;陈雪岚;徐锋;熊勇华;;核心链霉亲和素的原核表达[J];食品科学;2009年23期
8 余茂効;那淑敏;董扣洪;李新明;邹锡良;;抗噬菌体产α-淀粉酸菌株的选育[J];微生物学报;1986年03期
9 陈乃用;枯草芽孢杆菌中质粒的稳定性问题[J];微生物学通报;1993年04期
10 高健,铁翠娟,王忠彦,何秀萍,胡永松,张博润;枯草芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆及表达[J];微生物学通报;1998年06期
11 黄勤妮,刘佳,宋秀珍,杨秀山;大肠杆菌和枯草芽胞杆菌的原生质体融合[J];首都师范大学学报(自然科学版);2002年01期
12 吴丹莉,王艳飞,谷庆阳,吴祖泽;碱性成纤维细胞因子在枯草芽孢杆菌BS224中的表达[J];生物技术通讯;2002年06期
13 傅晓燕,陈卫,夏雨,张灏;带自身启动子的bgaB基因在枯草芽孢杆菌中的表达[J];食品与生物技术学报;2005年03期
14 肖怀秋;林亲录;李玉珍;;枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis Promax NTG_(24)发酵条件研究[J];中国食品添加剂;2005年06期
15 唐姬;刘国生;谢志雄;沈萍;;Bacillus subtilis自然感受态缺陷株蛋白质表达谱的初步分析[J];微生物学通报;2007年01期
16 陈晓月;金宁一;邹伟;海洋;马海利;李昌;屈勇刚;;β-半乳糖苷酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达[J];中国生物工程杂志;2008年05期
17 周凡;茆军;石庆华;张志东;姚正培;葛杰;;枯草芽孢杆菌P1果胶酯酶酶学性质研究[J];新疆农业大学学报;2008年04期
18 任尚美;王晓丽;马霞;赵林;刘霞;;枯草芽孢杆菌发酵生产γ-聚谷氨酸的动力学研究[J];中国酿造;2008年21期
19 张智;朱宏亮;李宏菊;王云清;宋静;;紫外诱变选育水解玉米蛋白的高产蛋白酶菌株及酶性质的研究[J];食品工业科技;2009年02期
20 李小俊;韩小艳;边艳青;;枯草芽孢杆菌A干粉菌剂的制备及其对桃果实病害的防治[J];河北北方学院学报(自然科学版);2010年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘桂君;孟佑婷;杨素玲;尚宏忠;;生防菌枯草芽孢杆菌的辐射诱变研究[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
2 马丽俐;Paul Wang;;栀子对紫外光诱导的豚鼠光老化的模型血清和皮肤超氧化物歧化酶(SOD)的影响[A];中医美容——2010年中华中医药学会中医美容分会学术年会论文集[C];2010年
3 蒋思婧;马立新;;枯草芽孢杆菌的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
4 李彬先;张惠营;;肺心病血液流变学与超氧化物歧化酶(SOD)及血气、酸碱相关性研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
5 李华;沈立荣;冯凤琴;李铎;;细菌型豆豉发酵菌株的鉴定[A];2009食品科技(北京)论坛会议指南[C];2009年
6 杨明明;;枯草芽孢杆菌高效表达系统的构建[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
7 钟娟;周金燕;李志东;雷宝良;谭红;;一种新型抗菌肽——捷安肽素的研究[A];中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2005年
8 游银伟;尤升波;岳寿松;;枯草芽孢杆菌YYW-1蛋白酶缺陷株诱变与筛选[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
9 徐辉;冷静;沈彤;朱启星;;三氯乙烯致敏豚鼠肝脏MDA含量和SOD活力的测定[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
10 亓雪晨;齐俊生;王琦;梅汝鸿;;枯草芽孢杆菌启动子片段的克隆及其在绿色荧光蛋白标记中的应用[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 齐东梅;药食源芽孢杆菌的分类鉴定及枯草芽孢杆菌H110抑菌特性研究[D];中国农业大学;2005年
2 马海利;O型FMDV复合表位/CTB重组枯草芽孢杆菌构建与实验免疫[D];吉林大学;2008年
3 柏亚铎;犬瘟热病毒、犬冠状病毒入侵宿主细胞机制研究[D];中国农业大学;2005年
4 张怀;人Hepcidin融合表达载体的构建、在大肠杆菌中的表达及制备研究[D];北京化工大学;2005年
5 王玉梅;嵌合降钙素基因的构建及表达[D];中国海洋大学;2005年
6 徐海燕;人BAFF基因转染细胞及其单克隆抗体的生物学特性[D];苏州大学;2005年
7 石炳兴;靶向溶栓抗凝双功能融合蛋白的构建表达及在血栓疾病治疗中的应用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
8 蒋骅;GST-EGFR融合蛋白冲击树突状细胞治疗头颈部鳞状细胞癌体内外实验观察[D];浙江大学;2008年
9 徐越驰;组氨酸为活性中心的蛋白质酪氨酸磷酸酶和细胞自噬标记物的研究[D];吉林大学;2010年
10 刘荣;人4-1BBL/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20双功能抗体的细胞毒作用及其机制研究[D];中国协和医科大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵怡;枯草芽孢杆菌ATCC 9372 Mn-SOD的克隆、表达与特性研究[D];暨南大学;2011年
2 徐晶;弹性蛋白酶发酵生产条件优化及性质研究[D];东北农业大学;2008年
3 石岩;欧文氏杆菌突变体的构建及枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶基因的克隆和表达[D];中国农业科学院;2010年
4 吴宝昌;枯草芽孢杆菌混合发酵制备豆粕饲料的研究[D];山东轻工业学院;2010年
5 徐广军;枯草芽孢杆菌BS_(3-1)对小麦赤霉病(Fusarium graminearum)的生物防治研究[D];四川农业大学;2003年
6 莫宏春;枯草芽孢杆菌6-磷酸葡萄糖脱氢酶的分离纯化和部分性质[D];四川大学;2003年
7 邹立扣;枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因在大肠杆菌中的表达及玉米表达载体的构建[D];四川农业大学;2004年
8 周红梅;生防枯草芽孢杆菌mRNA差异显示分析[D];黑龙江大学;2008年
9 王君;大蒜汁对枯草芽孢杆菌抑制作用的研究[D];陕西师范大学;2008年
10 方晓雨;基于二氧化硅的材料固定化枯草芽孢杆菌的研究[D];武汉理工大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;浅谈枯草芽孢杆菌在水产养殖上的应用[N];中国海洋报;2003年
2 王珩 陈哲 本报记者 王富亮;人类健康的保护神——植物SOD[N];大众科技报;2009年
3 记者 王富亮 通讯员 陈哲;SOD学术研讨会开幕[N];大众科技报;2009年
4 本报记者 王富亮 通讯员 陈哲;助推科普进社区,让更多的人了解植物SOD[N];大众科技报;2009年
5 王珩;人类健康的保护神——植物SOD[N];大众科技报;2009年
6 兆军 原驰 遥远;我国拥有大批量生产人源SOD能力[N];吉林日报;2010年
7 记者 张兆军;我国拥有大批量生产人源SOD能力[N];科技日报;2010年
8 江苏省淡水水产研究所研究员 徐在宽 江苏省海洋与渔业局工程师 仇丽;复合型枯草芽孢杆菌活菌生物净水剂在特种水产养殖中的应用探讨[N];科技日报;2001年
9 魏崇赞 记者 张雁飞;江苏省首家SOD果蔬生产企业成立[N];中国食品质量报;2010年
10 记者 张文智 通讯员 张军剑;庆城“SOD”奶蜜苹果论个卖[N];甘肃经济日报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978