单增李斯特氏菌的分离鉴定及抑制或降解其生物被膜的研究

【摘要】：单核增生李斯特氏菌是常见的食源性致病菌，由它引起的食源性疾病反复爆发。该菌能够形成生物被膜定植在食品加工和零售设施表面，抵抗不良生存环境，不易去除，危害食品安全。本论文参照SNT0184.1-2005标准从食品中选择性分离单核增生李斯特氏菌，结合生理生化鉴定方法以及SNT0184.2-2006标准中多重PCR方法对分离出的菌株进行鉴定。并采用96孔PVC板培养法分析了这些菌株的产生物被膜的情况。论文还研究了不同时间添加、不同浓度的吡啶羧酸铁络合物和尼泊金酯系列化合物对单核增生李斯特氏菌ATCC19111生物被膜的抑制和降解作用，结果如下： 1参考行业标准SN/T0184.1-2005，采用选择性培养基Fraser肉汤和PALCAM琼脂平板，结合鼠李糖、木糖发酵管，多重PCR扩增技术等，从30个食物样本中初步筛选鉴定单核增生李斯特氏菌，结果分离鉴定得到13株单核增生李斯特氏菌疑似阳性菌株，分别来自8个不同的样本，检出率约为26.7%。 2对这13株李斯特菌菌株分别做在培养基LB,BHI,TSB中的产生物被膜研究，筛选出有明显产生物被膜的菌株11株，编号分别为T12、T13、O11、F11、H14、Q11、S11、R12、M12、F13、R11。来自8个不同的样本，分别是某品牌水饺C，生牛肉片，牛肉丸，鸡肉，鸡中翼，散称的水饺，某品牌水饺B和猪肉，这些菌株在LB培养基中产膜最多，OD值均达到0.7以上。 3不同浓度的尼泊金酯钠盐（0.006μmol/ml、0.013μmol/ml，0.025μmol/ml）在0h添加到单增李斯特氏菌培养液中，然后继续培养20小时左右，检测培养物菌浓度和产生物被膜的情况。结果四种尼泊金酯钠盐都有效的抑制了李斯特氏菌的生长，其中尼泊金十二酯钠盐抑菌效果最好，但是在选定的浓度范围内，没有发现高浓度的尼泊金酯钠盐有更强的抑菌和抑制生物被膜作用。 4分别将不同浓度的尼泊金酯系列（0.05μmol/ml,0.1μmol/ml,0.15μmol/ml）在不同时间0h、4h、8h、18h、24h添加到单增李斯特氏菌培养液中，然后继续培养20小时左右，检测培养物菌浓度和产生物被膜的情况。结果发现3个浓度的尼泊金庚酯和辛酯于0h和4h添加到单增李斯特氏菌的培养物中有效地抑制了菌的生长，但添加到8h以后的培养物中，抑制效果下降，表明该物质对低浓度的李斯特氏菌培养物有更好的抑制效果。而在产生物被膜方面的影响，这两个酯在各添加浓度和时间对生物被膜均表现出了很好的抑制和降解作用。各浓度的尼泊金十一酯和十二酯在各添加时间均对李斯特菌的生长和产生物被膜表现出明显的抑制作用。在选定的浓度范围内，没有发现高浓度的尼泊金酯有更强的抑菌和抑制生物被膜作用。 5在0h、4h、8h、18h、24h向单增李斯特氏菌培养液添加不同浓度的吡啶羧酸铁络合物(0.1μmol/ml，0.2μmol/ml，0.3μmol/ml)，继续培养至20小时左右测定培养物菌体浓度和生物被膜的产生。结果发现吡啶羧酸铁络合物在不同时间均对单增李斯特氏菌ATCC19111产生物被膜有明显的抑制和降解作用，而对菌株的生长浓度影响不大，吡啶羧酸铁络合物浓度的大小对生物被膜的抑制和降解没有显著的影响，最佳抑制浓度为0.1μmol/ml。