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枸杞多糖对人视网膜色素上皮细胞的保护作用

劳苇  
【摘要】:目的 研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides, LBP)对H2O2诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19细胞)损伤的保护作用,以及探讨枸杞多糖对CoCl2诱导的ARPE-19细胞表达VEGF的影响。方法 采用CCk-8法检测不同浓度H2O2诱导的ARPE-19细胞的存活率,构建氧化损伤模型;采用CCk-8法检测不同浓度LBP对ARPE-19细胞活力的影响;采用CCk-8法和流式细胞仪双染法检测LBP对H2O2诱导的ARPE-19细胞的存活率和凋亡比例的影响;采用实时定量PCR法分别检测LBP干预、H2O2损伤和正常情况下细胞Bax和Bcl-2表达水平的差异;采用ELISA法检测不同浓度CoCl2的诱导对ARPE-19细胞分泌VEGF的影响;采用实时定量PCR法分别检测LBP干预、CoCl2诱导和正常情况下细胞VEGF表达水平的差异。结果 CCk-8结果显示,H2O2浓度为500-900μmol/L时,细胞存活率与对照组有统计学差异,损伤作用呈浓度依赖性,其中当H2O2浓度为500μmol/L,细胞半数存活,为最佳氧化损伤模型;CCk-8结果显示,LBP浓度为10μg/ml-5mg/ml时,细胞存活率与对照组无统计学差异,而当LBP浓度为10mg/ml时,细胞活性受抑制;CCk-8结果显示,LBP浓度为100-1000μg/ml时,细胞存活率与对照组有统计学差异,其中LBP浓度为500μg/ml时,保护效果最明显;流式细胞仪双染法检测结果显示,LBP干预组细胞凋亡比例明显低于H2O2损伤组;实时定量PCR结果显示,LBP干预后细胞Bax表达降低,Bcl-2表达升高,与H2O2损伤组有统计学差异;ELISA结果显示CoCl2浓度为150μmol/L和450μmol/L时,细胞VEGF分泌量与对照组有统计学差异,其中当CoCl2浓度为150μmol/L时,VEGF分泌量最高;实时定量PCR结果显示,LBP浓度为10μg/ml、25μg/ml时,VEGF表达降低,与CoCl2诱导组有统计学差异,其中LBP浓度为25μg/ml时,VEGF表达抑制最明显。 结论1.枸杞多糖对H2O2诱导的ARPE-19细胞损伤有保护作用。2.枸杞多糖对ARPE-19细胞的抗氧化保护作用可能与抑制促凋亡基因Bax表达和上调抑凋亡基因Bcl-2表达有关。3.枸杞多糖对CoCl2诱导的ARPE-19细胞VEGF表达升高有抑制作用。


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