亚麻籽环肽分离纯化及其与金属离子相互作用研究

【摘要】：亚麻籽环肽是由8到10个氨基酸残基组成的抗炎性环多肽,其分子量约1k Da,具有高效的生理活性。本研究首先对从天然亚麻籽中提取的环肽粗提物进行组分和氧化还原性质的探讨,采用HPLC测定亚麻籽环肽粗提物中环肽C、E、D、A的含量,并通过还原的方法减少混合物中的环肽种类后,采用制备液相色谱获得环肽单体。其次,通过荧光分光光谱法,核磁共振光谱法及质谱法探讨了环肽与重金属的螯合特性,同时模拟人体重金属浓度,探索环肽重金属解毒功能性食品的可行性。研究结果总结如下:(1)采用HPLC测定亚麻籽环肽粗提物单体组成和含量,结果表明被测峰分离度良好,线性范围10~150μg/m L,相关系数0.9990~0.9997。环肽混合物中四种目标环肽的含量分别为CLC 8.1 wt%,CLE 7.7 wt%,CLD 0.6 wt%,CLA 35.2wt%。(2)经过氧化或还原反应之后,环肽种类均发生改变,经HPLC定性分析,氧化后剩余六种环肽,还原后的环肽仅剩下4种类型,通过与已知峰对比,得知该四种环肽分别为环肽B、L、A和M,在C18分析柱上良好分离,以此为理论依据,在制备液相中,采用Microsorb 100-5 C18制备柱(240 mm×21.4 mm),70%乙腈等度洗脱,可有效分离环肽单体。(3)在以荧光分光光度法探究环肽螯合重金属的特性分析中,不适宜选用环肽粗提物为原材料,因其杂质成分对荧光吸收的干扰较大,造成测试结果不准确。(4)通过1H-NMR检测,混合环肽CE、混合环肽JKA、环肽E、环肽J在分别加入醋酸锌、硫酸锌、醋酸铅、硝酸镉四种金属盐溶液后,质子化学位移均有不同程度的改变,表明环肽与金属之间形成了稳定络合物,四种金属盐的螯合能力依次为Zn(OAc)2Pb(OAc)2Zn SO4Cd(NO3)2.环肽的结合金属离子能力随着其S原子氧化程度加深而减弱。(5)在ESI-MS检测条件下,在10-2 M~10-4 M浓度范围内,发现多种形式的环肽金属加合物,包括[CLs+M–2H]+,[CLs+M–2H]2+,[2CLs+M]2+等,以环肽硝酸镉络合物的信号峰强度最大,再次证明Cd2+具有很强的络合能力。在更低浓度条件下,很难找到螯合物信号。