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自身抗体免疫层析检测方法与重金属铬离子纳米ELISA的建立

姚翠泽  
【摘要】:目的:建立一种高效、快速(5~8 min)、简便的胶体金免疫层析试纸条应用于临床检测血清中自身抗体,用来辅助诊断自身免疫性疾病(Autoimmune diseases,AID),实现检测结果信息快速、及时的反馈。方法:抗SSA/SSB自身抗体免疫层析检测技术的建立,是利用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)标记于金纳米颗粒(Gold nanoparticles,Au NPs)上,并将金标SPA喷涂在结合垫上,抗原(SSA/SSB)喷涂在硝酸纤维素膜(NC膜)上特定位置作为检测线(Test line,T line),山羊抗人的多克隆抗体喷涂在NC膜的另一特定位置作为校准线(Calibration line,C line);对试纸条的样品垫、结合垫、NC膜、血清样品稀释缓冲液以及稀释倍数等方面的条件进行综合优化并组装试纸条。利用上述方法建立的胶体金免疫层析试纸条检测血清样本并与目前医院临床上常用的检测方法进行检测结果符合率的比较。结果:本实验建立的抗SSA抗体胶体金免疫层析试纸条与目前国内临床常用的LIA方法检测血清样本的结果总符合率为95.12%;本实验建立的抗SSB抗体胶体金免疫层析试纸条与目前临床常用的LIA方法检测血清样本的结果总符合率为97.82%。结论:本研究建立检测抗SSA抗体、抗SSB抗体的胶体金免疫层析试纸条检测临床血清样本与目前国内临床上使用的主要方法LIA、ELISA的检测结果均有较高的符合率,该方法操作简便,检测结果可在(5~8 min)内完成,有良好的市场应用前景。目的:建立一种新的、可裸眼观察检测结果的等离子纳米传感器,该方法检测结果判读简单,无需昂贵的仪器,可适用于医疗资源匮乏的地区。方法:利用过氧化氢能够腐蚀三角银纳米片,使得三角银纳米片的尺寸大小和形状发生改变,局部等离子共振(LSPR)发生改变从而表现出特有的光学特征(由蓝色变紫色)。根据这一现象,本研究建立了一种等离子纳米传感器去检测实际水样中的三价铬离子Cr(III)。该方法主要是在竞争ELISA的基础上(过氧化氢酶标记二抗),利用过氧化氢和三角银作为底物显色系统,过氧化氢酶消耗过氧化氢来调控体系中剩余过氧化氢的浓度,进而调控三角银纳米片受腐蚀的程度。三角银的这种LSPR变化强度(颜色和吸收光谱)与铬的浓度呈正相关,我们对该方法进行可行性验证、灵敏度和特异性评价并用该方法检测实际水样中的加标Cr(III)的浓度,检测结果与ICP-MS的检测结果进行比较。结果:本研究建立的等离子传感器检测Cr(III)可裸眼检测的灵敏度达到6.25 ng/m L。用银纳米片的LSPR位移分析时,该方法的线性范围为3.13 ng/m L-50 ng/m L,最低检测限为3.13 ng/m L,并且显示了良好的特异性。结论:本研究建立的检测Cr(III)的等离子纳米传感器,可以用于医疗资源匮乏的地区,无需使用昂贵的仪器也能对实际水样中的重金属浓度做初步检测。


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