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绿脓杆菌gyrA基因突变在氟喹诺酮类抗生素耐药机制中的作用

马真  
【摘要】: 目的: 铜绿假单孢菌(pseudomonas aeruginosa,PA)是院内感染最重要的条 件致病菌之一,由于它具有天然和获得耐药性,临床治疗非常困难。 氟喹诺酮类抗生素是抗铜绿假单孢菌较强的抗生素之一,随着近年 来的广泛使用,铜绿假单孢菌对氟喹诺酮类抗生素的耐药率有逐年 升高趋势。本课题从氟喹诺酮类抗生素对细菌的作用机制出发初步 探讨广州地区临床分离的铜绿假单孢菌对氟喹诺酮类抗生素(环丙沙 星和诺氟沙星)耐药性和gyrA基因突变的相关性,为临床合理使用 抗生素提供一些思路。 方法: 1.取肺部感染者痰或经纤支镜支气管刷取支气管分泌物作常规培养, 分离鉴定,获取PA菌145株。微量稀释法测定这些菌对氟喹诺酮类 抗生素环丙沙星和诺氟沙星MIC值,对比它们的耐药率; 2.多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析(PCR-RFLP)检测 铜绿假单孢菌gyrA基因第83位密码子点突变,探讨该点突变与铜 绿假单孢菌对氟喹诺酮类抗生素耐药性的关系。 结果: 1.分离培养获得145株PA中,微量稀释法测得耐诺氟沙星的铜绿假单 孢菌有55株,耐药率为37.9%;耐环丙沙星的铜绿假单孢菌有38株, 耐药率为26.2%;铜绿假单孢菌对诺氟沙星和环丙沙星的耐药率有 显著性差异(P<0.05)。 2.103株gyrA 83位密码子未突变菌株中,耐诺氟沙星菌和耐环丙沙星 菌分别占17.5%(18/103)和3.88%(4/103);而42株gyrA 83位 密码子突变株中,耐诺氟沙星和耐环丙沙星菌分别占88.1%(37/42) 和81.0%(34/42)。耐诺氟沙星菌分别在gyrA83位密码子未突变株 和突变株中所占比率有显著性差异;耐环丙沙星菌分别在gyrA83位 密码子未突变株和突变株中所占比率亦有显著性差异(P<0.01)。 结论: 1.目前广州地区的铜绿假单抱菌对环丙沙星的敏感性高于对诺氟沙星 的敏感性。 2.铜绿假单抱菌染色体 DNA gyrA基因第 83位密码子突变是广州地区 的铜 绿假单胞菌对氟喳诺酮类抗生素的重要耐药机制。 3.PCR.RFLP 是细菌对氟睦诺酮类抗生素耐药机制分子水平研究中较 快速、简单、经济的实验方法。 4.微量稀释法操作简单,结果准确,适于实验室科研工作及基层医院 细菌室采用提供准确的药物最低抑菌浓度。


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