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JTE-522体外对人胃癌细胞株AGS细胞凋亡的影响

李红良  
【摘要】: 目的:探讨COX-2抑制剂丌E-522对人胃癌细胞株AGS细胞的影响及其可能的分子机理。 方法:应用细胞培养、MTT、电镜、琼脂糖凝胶电泳、酶联免疫吸附实验(ELSIA)、流式细胞术、化学发光法、电泳迁移率实验(EMSA)、蛋白质印迹等方法研究JTE-522对AGS细胞增殖和凋亡的作用及其分子机理。 结果:JTE-522使体外培养的AGS细胞的生长明显受到抑制,并出现典型的凋亡形态学、生物化学改变,这些效应呈剂量依赖性。EMSA和Western blot结果显示AGS细胞经JTE-522处理后,IkBα的降解及NF-kB的活性可完全抑制。P53的蛋白水平显著升高,而Bcl-2的表达水平则明显降低,这些变化具有剂量依赖性。化学发光法显示使用JTE-522使细胞内活性氧(Reactive oxygen species ROS)浓度增加。在凋亡过程中Caspase 8,9的活性都被激活了。而JTE-522诱导的凋亡能够被四肽的Caspase 8,9抑制剂明显抑制。在凋亡过程中,我们还观察到Bax的膜转移、细胞色素C的释放伴随有膜电位的降低。Bax的膜转移、细胞色素C的释放以及Caspase 8,9的激活都可被Caspase广谱抑制剂Z-VAD.fmk及Caspase 8专一抑制剂AC-IETD-CHO所抑制。 结论: 1.JTE-522能够抑制AGS细胞生长,并诱导凋亡。 2.JTE-522使P53蛋白的表达升高,Bcl-2的表达下调,抑制NF-kB活性,这种抑制作用可能是通过抑制IkBα的降解而实现的,这些效应可能通过调节下游的细胞内活性氧水平升高而启动凋亡。 3.JTE-522激活Caspase 8、降低膜电位,而促进Bax的膜转移、导致细胞色素C的释放增加、先后激活Caspase 9和Caspase 3而启动凋亡。


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